一、喘安对哮喘大鼠可溶性白介素-2受体的影响（论文文献综述）
司东旭[1]（2021）在《肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究》文中研究指明目的基于前期支气管哮喘慢性持续期（Chronic duration of bronchial asthma,CDBA）中医干预方案研究成果,温润方组（Wenrunformulagroup,WRFG）良好控制率75.44%,明显优于常规辨证组（Routine syndrome differentiation group,RSDG）良好控制率 48.33%。本研究进一步通过分子生物学研究,证明“肺脾为核心脏腑整体辨证”的中医干预思路充分反映了中医治疗CDBA的优势与特色。构建基于“肺脾为核心脏腑整体辨证”CDBA免疫调控的生物学依据。方法本研究工作主要依托课题——支气管哮喘慢性持续期中医干预方案,分别在山东中医药大学附属医院、安徽中医药大学第一附属医院、北京中医药大学东直门医院、中国中医科学院西苑医院等四个研究中心,开展同时期、多中心、随机、对照、三盲的临床实用性随机对照优效设计研究。应用“肺脾为核心脏腑整体辨证”观指导思想下形成的“温润辛金培本”原理系列方药（简称温润方）为中医干预方案。共纳入符合研究要求病例128例,将入组病例随机分为WRFG和RSDG。为进一步观察两组治疗前血清免疫球蛋白、白介素谱系分布特点,以及治疗后血清免疫球蛋白、白介素谱系变化趋势,对符合要求的入组患者进行了二次筛选。同时,招募健康人群作为健康对照组（Healthy group,HG）,并收集受试者血清标本。采用ELISA竞争检测方法进行血清标本检测,开展“肺脾为核心脏腑整体辨证”治疗CDBA调节血清免疫球蛋白及血清白介素水平的免疫调控研究。结果1病例信息分析本研究根据现有各组血清病例数,结合纳入排除标准,确定纳入WRFG24例,RSDG 14例、HG 14例。WRFG与RSDG两组患者治疗前中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分比较中,只有腰膝酸软1（1,2）（WRFG）、0（0,1）（RSDG）,具有统计学差异。其他单项中医症状体征及中医症状体征总积分均无统计学差异;WRFG与RSDG两组患者治疗后中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分比较中,均无统计学差异;WRFG组患者疗前疗后中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分比较中,喘息、乏力、口干、心悸、头晕、畏寒肢冷、腰膝酸软、咳嗽、咳嗽性质、咳痰不爽、总分具有统计学差异。其他单项中医症状体征均有下降趋势,但无统计学差异;RSDG组患者疗前疗后中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分比较中,气短、乏力、口干、畏寒肢冷、咳嗽、咳嗽性质、总分具有统计学差异。其他单项中医症状体征多有下降趋势,但无统计学差异;WRFG与RSDG中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分差值比较中,WRFG在喘息、口苦、口干、心悸、纳呆、腹胀、口渴喜饮、大便不调、夜尿频、头晕、腰膝酸软、总分等方面较RSDG症状积分降低,但均无统计学差异;WRFG与RSDG疗前疗后肺功能比较,两组患者在FEV1%FVC、PEF%等方面无统计学差异。2血清免疫球蛋白2.1治疗前组间比较WRFG血清IgA、IgG水平较RSDG和HG低,具有统计学差异。WRFG血清IgE水平较RSDG无统计学差异,较HG低,具有统计学差异。RSDG血清IgA、IgG、IgE水平较HG无统计学差异。2.2治疗后组间比较WRFG血清IgA、IgG水平较RSDG和HG无统计学差异。WRFG血清IgE水平较RSDG高,具有统计学差异,较HG无统计学差异。RSDG血清IgA、IgG、IgE水平较HG无统计学差异。3血清促炎白介素3.1治疗前组间比较WRFG 血清 IL-1β、IL-2、IL-5、IL-7、IL-8、IL-13、IL-20、IL-25、IL-36y 水平较RSDG、HG 低,具有统计学差异。WRFG 血清 IL-3、IL-4、IL-6、IL-9、IL-33 水平较RSDG无统计学差异,较HG低,具有统计学差异。RSDG 血清 IL-1β、IL-7、IL-8、IL-9、IL-13、IL-20、IL-25、IL-33、IL-36γ 水平较HG无统计学差异。RSDG血清IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6水平较HG低,具有统计学差异。3.2治疗后组间比较WRFG 血清 IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-33、IL-36γ 水平较 RSDG 无统计学差异,较HG低,具有统计学差异。WRFG血清IL-2、IL-3、IL-8、IL-13、IL-20、IL-25水平较RSDG、HG无统计学差异。RSDG 血清 IL-1β、IL-3、IL-7、IL-8、IL-13、IL-20、IL-33 水平较 HG 无统计学差异。RSDG 血清 IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-25、IL-36γ 水平较 HG 低,具有统计学差异。4血清抗炎白介素4.1治疗前组间比较WRFG 血清 IL-10、IL-21、IL-27、IL-28A、IL-35 水平较 RSDG、HG 低,具有统计学差异;WRFG血清IL-29水平较RSDG低,具有统计学差异,较HG无统计学差异;血清IL-12、IL-37水平较RSDG无统计学差异,较HG低,具有统计学差异。RSDG 血清 IL-10、IL-12、IL-21、IL-27、IL-28A、IL-29、IL-35、IL-37 水平较 HG无统计学差异。4.2治疗后组间比较WRFG血清IL-10、IL-12、IL-21水平较RSDG无统计学差异,较HG低,具有统计学差异;WRFG血清IL-27、IL-29、IL-35、IL-37水平较RSDG、HG无统计学差异;WRFG血清IL-28A水平较RSDG低,具有统计学差异,较HG无统计学差异。RSDG 血清 IL-10、IL-12、IL-21、IL-27、IL-28A、IL-29、IL-35、IL-37 水平较 HG无统计学差异。结论1 WRFG组在改善哮喘患者喘息、咳嗽、咳嗽性质、咳痰不爽、乏力、口干、心悸、头晕、畏寒肢冷、腰膝酸软、总分等全身症状体征方面具有明显的优势。体现了WRFG“肺脾为核心脏腑整体辨证”,整体诊治CDBA的优势与特色。2 WRFG治疗后血清免疫球蛋白、血清促炎和抗炎白介素水平升高并接近健康人水平,可能与温润方减轻了哮喘患者气道慢性炎症这一基础病理损害,使哮喘患者气道炎症局部对较高的血清促炎白介素水平耐受性增强,提高了气道对损伤因子的免疫防御及修复能力有关。3 CDBA具有多种免疫细胞及细胞组分参与的慢性气道炎症病理变化基础,炎症、免疫参与了疾病宏观表现的微观病理变化。反之,不同的微观炎症免疫调控失衡状态影响着宏观中医哮喘的病机演变。CDBA存在着“肺脾为核心多脏虚”的关键病机共性规律。“肺脾为核心脏腑整体辨证”是在全面客观认识CDBA脏腑关系与病机演变规律基础上对中医整体观念、脏腑辨证的继承、发展、应用,强调以“肺脾为核心”的整体观揭示哮喘发病机制。
田福玲[2]（2019）在《基于“天气通于肺”理论的支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠自噬功能及中药干预机制研究》文中认为目的:探讨“天气通于肺”的理论渊源及主要内容,分析雾霾的特性及其与哮喘寒饮蕴肺证的关系,研究烟熏环境下寒凉刺激诱发的支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠的致病机制,以及中药对肺组织内细胞自噬的干预机制。方法:本文采用理论探讨与实验研究相结合的方法。1.理论研究:运用文献研究和理论分析的方法,探讨“天气通于肺”的理论内涵、渊源及主要内容,肺与自然的相关性,雾霾的特性及其与哮喘寒饮蕴肺证的关系。同时研究肺阳与哮喘寒饮蕴肺证的关系以及寒饮蕴肺证的内涵、病因病机及治疗。2.实验研究:采用卵清白蛋白（OVA）致敏,给予寒凉和饮冷刺激、利用香烟烟雾给予烟熏刺激,以及让大鼠在水中游泳使其劳累的方法,构建烟熏环境下支气管哮喘寒饮蕴肺证病证结合的大鼠模型,并分别用小青龙汤及温阳化饮方进行干预,观察相关检测指标。结果:运用中医传统病因与现代医学病理模型相结合的造模方法,成功复制了烟熏环境下哮喘寒饮蕴肺证大鼠病证结合模型。对比研究烟熏组和非烟熏组支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠肺功能和血清中炎性细胞因子的变化,明确了雾霾能加重支气管哮喘寒饮蕴肺证的发病程度,以及雾霾加重支气管哮喘寒饮蕴肺证的病理机制。结果显示:雾霾可以使支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠肺功能的吸气阻力（Ri）、呼气阻力（Re）升高,顺应性（Cdyn）降低,导致大鼠哮喘症状加重;其机制可能在于烟熏可诱导哮喘寒饮蕴肺证大鼠血清IL-13、TGF-β1的水平升高,降低IFN-γ的水平,从而加重气道炎症反应。对烟熏环境下寒饮蕴肺证大鼠进行实验观察及药物干预,并检测造模动物的肺功能、病理切片、炎症因子等指标,结果显示:温阳化饮方可促使大鼠周围血中IL-10、IL-18、IFN-γ不同程度的提高,使大鼠周围血中IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β和TNF-α不同程度的降低,从而抑制过敏反应,调控炎症的发生、发展;其机制可能是通过降低大鼠的自噬基因Atg和自噬蛋白Beclin1和LC3-a/b表达,抑制细胞外基质的分泌和肺成纤维细胞胶原沉积过程,减缓气道重塑,抑制哮喘的发生发展。结论:“天气通于肺”中的“天气”,指的是自然界的清净之气,与肺气是相通应的。雾霾是一种复合型致病因素,其性弥散,常兼夹湿邪、热邪侵犯人体肺脏而发病。烟草烟雾在性质和致病特点上与雾霾有很多相似之处,而二者含有的颗粒物的主要成分均是PM2.5。人体津液的正常输布需要阳气的蒸腾气化作用,肺阳充足,则宣发肃降功能正常,津液得以正常输布。支气管哮喘寒饮蕴肺证病证的病理机制是肺阳虚,导致痰饮内停,致使大鼠血清IL-13、TGF-β1的水平升高,降低IFN-γ的水平,从而加重气道炎症反应;“温阳化饮方”的作用机制可能在于通过降低自噬基因Atg的表达及蛋白Beclin1和LC3水平,减轻哮喘气道炎症水平,逆转气道重塑,调控气道高反应。
顾文婧[3]（2016）在《B7-H3在儿童支气管哮喘中的作用及机制研究》文中指出第一部分可溶性B7-H3（s B7-H3）在支气管哮喘患儿血浆中的表达及临床意义目的:研究支气管哮喘患儿外周血中可溶性B7-H3（s B7-H3）的表达水平,并分析其与其他细胞因子的相关性,探讨s B7-H3在支气管哮喘中的异常表达及临床意义。方法:选取2013年6月～2015年5月在苏州大学附属儿童医院呼吸科住院治疗并符合诊断标准的支气管哮喘患儿23例,及同期住院行外科择期手术的患儿14例作为对照组,哮喘组患儿采集住院后24小时内及出院前24小时内的外周血,分为哮喘急性期组和恢复期组,对照组患儿术前采外周血。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆s B7-H3、IL-4、IFN-γ、IL-17的表达水平,分析s B7-H3与其他细胞因子的相关性。结果:血浆中s B7-H3和IL-4水平在哮喘急性发作期组明显升高,显着高于恢复期组和对照组（P=0.049,P<0.001）,经过治疗后72.9%的患儿血浆s B7-H3和87.0%的患儿血浆IL-4水平降低,但总体水平仍高于对照组（P=0.028）;哮喘急性期患儿血浆IFN-γ水平显着降低,低于恢复期组和对照组（P=0.018,P=0.001）,经过治疗后,73.9%的患儿血浆IFN-γ水平较急性期升高,但总体水平仍低于对照组（P=0.028）;血浆IL-17在三组患儿之间差异不明显（P=0.084）。治疗前后哮喘患儿血浆s B7-H3和IL-4水平升高和降低情况一致性较好（Kappa=0.596,P=0.002）,而和IFN-γ、IL-17的一致性较差（Kappa=-0.232和0.055,P>0.05）。结论:哮喘患儿体内存在Th1/Th2的免疫失衡;s B7-H3在哮喘急性期表达异常升高;s B7-H3对Th2细胞可能存在正性调控作用。第二部分B7-H3融合蛋白对小鼠哮喘模型作用的研究目的:研究B7-H3融合蛋白在小鼠哮喘模型中的作用;探讨B7-H3在哮喘免疫机制,特别是Th1/Th2失衡中的地位。方法:采购SPF级的6周龄C57BL/6小黑鼠,随机分为三组:生理盐水对照组（C组）、哮喘组（N组）、哮喘加B7-H3融合蛋白干预组（NB组）。其中N组和NB组均给予OVA致敏及激发（0、7、14天给予OVA腹腔注射致敏,22、24、26、28天分别给予OVA半小时雾化吸入）,C组给予同剂量生理盐水注射和激发。此外,NB分别在0、3、7、10、14天腹腔注射B7-H3融合蛋白50μg。各组小鼠于末次激发24小时后麻醉处死,采集血浆。小鼠进行支气管肺泡灌洗,支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞总数计数及分类计数;采用ELISA法测定小鼠BALF及血浆中的IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-17的水平;小鼠肺组织切片行HE染色、PAS染色及B7-H3免疫组化,观察肺组织炎性细胞及嗜酸性粒细胞浸润情况、气道粘液分泌情况及肺组织B7-H3表达情况。结果:N组小鼠BALF中总细胞数和嗜酸性粒细胞比例明显高于C组小鼠（P均为0.004）,NB组小鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞比例最高,显着高于N组和C组小鼠（P<0.05）;N组小鼠血浆及BALF中IFN-γ较C组降低,而IL-4、IL-5和IL-17较对照组升高（P均<0.05）,NB组较N组小鼠血浆及BALF中IFN-γ、IL-4及IL-5均有不同程度的升高,而IL-17则没有显着差异（P>0.05）;肺组织病理染色显示C组小鼠肺组织无明显炎性细胞浸润及粘液分泌,N组小鼠肺组织及气道周围可见较多炎性细胞浸润,气道内可见红色酸性粘液分泌亢进,而NB组小鼠肺组织及气道周围炎性细胞浸润更为明显,气道内几乎被酸性粘液堵塞;免疫组化显示C组小鼠肺组织中几乎无B7-H3表达,N组小鼠B7-H3表达较高,NB组小鼠肺组织中B7-H3表达最高,显着高于C组和N组小鼠（P均<0.05）。结论:B7-H3融合蛋白能够同时上调Th1和Th2型免疫反应,加重肺组织的病理改变。第三部分Toll样受体2信号对B7-H3作用的影响目的:揭示B7-H3与Toll样受体2（TLR2）在哮喘模型中的作用及相关性,进一步阐明B7-H3在哮喘模型中参与机体免疫炎症反应的机制。方法:采购SPF级的6周龄C57BL/6和TLR2-/-小黑鼠,分为五组:生理盐水对照组（C组）、野生型小鼠哮喘组（N组）、野生型哮喘小鼠加B7-H3融合蛋白干预组（NB组）、TLR2-/-小鼠哮喘组（T组）和TLR2-/-哮喘小鼠加B7-H3融合蛋白干预组（TB组）。其中N、NB、T、TB组均给予OVA致敏及激发（0、7、14天给予OVA腹腔注射致敏,22、24、26、28天分别给予OVA半小时雾化吸入）,C组给予同剂量生理盐水注射和激发。NB和TB组分别在0、3、7、10、14天腹腔注射B7-H3融合蛋白50μg。各组小鼠于末次激发24小时后麻醉处死,采集血浆。小鼠进行支气管肺泡灌洗,BALF进行细胞总数计数及分类计数;采用ELISA法测定小鼠BALF及血浆中的IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-17的水平;小鼠肺组织切片行HE染色、PAS染色及B7-H3和NF-κB免疫组化,观察肺组织炎性细胞及嗜酸性粒细胞浸润情况、气道粘液分泌情况及肺组织B7-H3和NF-κB表达情况。结果:T组小鼠BALF中总细胞数及嗜酸性细胞比例较C组有所升高（P分别为0.025和0.006）,但显着低于N组（P均为0.004）;而TB组小鼠相比T组小鼠总细胞数和嗜酸性细胞比例也有显着升高（P分别为0.006和0.004）;T组相比N组小鼠,血浆及BALF中IL-4、IL-5显着降低而IFN-γ水平显着升高（P均<0.05）,除BALF中IFN-γ水平低于C组外（P=0.006）,其余均与C组无统计学差异（P均>0.05）;TB组血浆中IL-4、IL-5及IFN-γ水平较T组均有不同程度升高;肺组织病理染色显示T组小鼠肺组织及气管周围可见炎性细胞浸润,但较N组小鼠减轻,气道内可见红色酸性粘液分泌亢进,与N组小鼠相仿,TB组较T组肺组织及气管周围炎性细胞浸润变化不明显,但气道内粘液分泌更为亢进,与NB组小鼠相仿;B7-H3免疫组化显示NB组和TB组小鼠肺组织B7-H3表达最高,显着高于其余各组（P均<0.05）,其次为N组和T组小鼠,C组小鼠肺组织几乎未见B7-H3表达;NF-κB免疫组化显示C组、T组和TB组小鼠肺组织中NF-κB表达量相近,显着低于N组和NB组小鼠（P=0.004）。结论:TLR2受体与哮喘的发生发展密切相关,阻断TLR2途径可以显着减轻哮喘的临床症状及病理改变;哮喘模型中B7-H3产生作用并不依赖TLR2受体,至少不仅仅依赖TLR2受体。
姜晓红[4]（2015）在《雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的影响及机制研究》文中提出目的:研究母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的防治作用,探讨其作用机制。方法:予OVA致敏制作Balb/c哮喘模型、呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）滴鼻制作RSV感染模型,分别于模型制作前后予母牛分枝杆菌（商品名:微卡）雾化或腹腔注射。哮喘预防组于哮喘模型制作前1个月分别予微卡雾化或腹腔注射,哮喘模型制作成功后处死小鼠;哮喘治疗组于哮喘模型制成后雾化吸入微卡,分别于治疗前、治疗3天、治疗5天处死小鼠;RSV感染预防组分别从量—效关系和时—效关系研究,时—效关系于RSV感染模型制作前1个月或1周分别予微卡雾化吸入或腹腔注射,用106PFU RSV感染制作病毒感染模型。量—效关系于RSV感染模型制作前1周分别用1支或3支微卡雾化吸入,分别用106PFU和105PFU RSV感染制作病毒感染模型。感染后第4天处死小鼠;RSV感染治疗组于RSV感染后第1天雾化吸入微卡,治疗第5天处死小鼠。以上各组均设正常对照组和模型对照组。所有小鼠处死前予无创肺功能仪检测气道反应性,哮喘组病理观察气道炎症,ELISA检测BALF中IL-9、OVA-IgE浓度,流式细胞术检测肺 γδTCR+CD 3+、IL-9+CD3+、IL-10+CD3+、IL-9+γδTCR+、IL-10+γ8TCR+淋巴细胞百分数,荧光定量PCR法测定肺IL-9R mRNA水平,哮喘预防组同时予免疫组化检测肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达,荧光定量PCR检测肺NGF mRNA水平;病毒组除了以上方法外予电镜、肺免疫荧光法观察肺RSV感染情况,荧光定量PCR检测肺IL9R、PU.1、PD-L2、JAK1、STAT1、STAT5A、RSV、IFN-y、TLR7、TLR8 mRNA 水平,免疫组化监测肺EGFR、NF09、Acetylcholine含量。结果:与哮喘对照组相比,哮喘预防组气道反应性均明显下降、气道炎症明显减轻;肺IL-9、OVA-IgE、IL-9R mRNA、NGF mRNA水平明显下降、IL-10水平明显增高;肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达明显下降。哮喘治疗组气道炎症明显减轻、肺IL-9水平明显下降、IL-10水平明显增高。RSV预防和治疗组较对照组比较电镜下RSV明显减少、免疫荧光示肺抗RSV明显减弱、RSV mRNA明显下降,机制研究发现微卡干预后IL-9水平明显下降、IL-10水平明显增高;IL-9-JAK1-STAT通路研究结果示JAK1、STAT1、STAT5A水平明显增高;TLR7、TLR8 mRNA水平明显增高,PU.1mRNA水平明显降低,肺免疫组化NF09、Acetylcholine、EGFR表达明显下降。以小剂量微卡短期雾化吸入效果最佳。RSV感染治疗组同时发现微卡雾化后肺γδT细胞明显增多,但IL-9+γδT细胞明显减少。结论:实验剂量微卡雾化吸入可用于小鼠哮喘的防治,与其调节Th9细胞、γδT细胞、BDNF、NF09、Acetylcholine有关;实验剂量微卡雾化吸入可用于小鼠RSV感染的防治,与其调节Th9细胞、γδT细胞、IL-9-JAK-STAT 通路、TLR7、TLR8、PU.1、神经机制、EGFR 等有关。第一部分 雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠支气管哮喘的影响及机制研究第一节 雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠支气管哮喘及对Th9细胞功能的影响目的:观察母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠支气管哮喘的预防作用及对Th9细胞功能的影响方法:24只雌性Balb/c小鼠按随机数字表法分为4组,每组6只:正常对照组、哮喘对照组、雾化吸入预防组、腹腔注射预防组。雾化吸入预防组于哮喘模型制作前一个月雾化吸入母牛分枝杆菌,每天1次,连续5天;腹腔注射预防组于哮喘模型制作前一个月腹腔注射母牛分枝杆菌,每天1次,连续5天;正常对照组和哮喘对照组雾化吸入PBS液,每天1次,连续5天。卵清蛋白（OVA）致敏制作小鼠支气管哮喘模型。哮喘模型制成后4组小鼠予小动物无创肺功能仪检测气道高反应性;HE染色和PAS染色观察小鼠气道炎症变化;ELISA法检测小鼠BALF中IL-9、OVA-IgE浓度水平;流式细胞术检测肺γδTCR+CD 3+、IL-9+CD3+、IL-10+CD3+、IL-9+γδTCR+、IL-10+yδTCR+淋巴细胞百分数;荧光定量PCR法测定肺IL-9R mRNA水平。结果:与正常对照组相比,哮喘对照组气道炎症明显,气道反应性明显增高（P<0.05）,BALF 中 IL-9、OVA-IgE 浓度明显增高（P<0.01,P<0.001）,γδTCR+CD3+、IL-9+γδTCR+、IL-9+ CD3+淋巴细胞百分数明显高于正常对照组（P值均<0.001）,IL-10+CD3+淋巴细胞百分数低于正常对照组（P<0.05）,而IL-10+γδTCR+淋巴细胞百分数与正常对照组无差异（P>0.05）。雾化吸入及腹腔注射预防组气道反应性均明显低于哮喘对照组（P<0.05）;气道炎症病变较哮喘对照组减轻;BALF中IL-9、OVA-IgE浓度明显低于哮喘对照组（P 值均<0.001）;肺 γδTCR+CD3+、IL-9+CD3+、IL-9+γδTCR+淋巴细胞百分数均明显低于哮喘对照组（P值均<0.001）,而IL-10+CD3+、IL-10+γδTCR+淋巴细胞百分数明显高于哮喘对照组（P值均<0.01）;肺IL-9R mRNA水平明显低于哮喘对照组（P<0.0001,P<0.01）。结论:母牛分枝杆菌雾化吸入与腹腔注射均可用于小鼠支气管哮喘的预防,其机制可能是通过诱导γδT细胞分泌IL-10增多、抑制γδT细胞分泌IL-9减少、γδT细胞呈IL-10优势表达而发挥作用,γδT细胞可能是Th9细胞家族成员之一。第二节 雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠支气管哮喘的神经机制研究目的:探讨母牛分枝杆菌雾化吸入预防小鼠支气管哮喘的神经机制方法:将24只雌性Balb/c小鼠按随机数字表法分为4组,每组6只:正常对照组、哮喘对照组、雾化吸入预防组、腹腔注射预防组。雾化吸入预防组于哮喘模型制作前一个月雾化吸入母牛分枝杆菌（商品名:微卡）,每天1次,连续5天;腹腔注射预防组于哮喘模型制作前一个月腹腔注射母牛分枝杆菌,每天1次,连续5天;正常对照组和哮喘对照组雾化吸入PBS液,每天1次,连续5天。卵清蛋白（OVA）致敏制作小鼠支气管哮喘模型。免疫组化检测肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达,荧光定量PCR检测肺NGF mRNA水平。结果:与正常对照组相比,哮喘对照组肺BDNF、NF09及Acetylcholine表达明显增高,荧光定量PCR示肺NGF mRNA水平明显增高;微卡雾化吸入组肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达及NGF mRNA水平较哮喘对照组明显降低;微卡腹腔注射组BDNF、Acetylcholine表达较哮喘组明显降低（P<0.05,P<0.001）,但高于微卡雾化吸入组（P值均<0.01）。结论:微卡雾化吸入可下调肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达及NGF mRNA水平,发挥着调节神经机制、抗胆碱能的作用,这可能是其预防哮喘的重要机制。第三节 雾化吸入母牛分枝杆菌治疗小鼠支气管哮喘及对Th9细胞功能的影响目的:观察母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠支气管哮喘的治疗作用及对Th9细胞功能的影响方法:36只雌性Balb/c小鼠按随机数字表法分为6组,每组6只:正常对照组（A）、哮喘治疗前（B0）、微卡雾化吸入治疗组（B3、B5）、哮喘治疗对照组（C3、C5）。予卵清蛋白（OVA）致敏制作小鼠支气管哮喘模型。母牛分枝杆菌（商品名:微卡）雾化吸入治疗组于哮喘模型制成后雾化吸入母牛分枝杆菌22.5μg+PBS液30ml,每天1次,连续5天;哮喘治疗对照组雾化吸入PBS液30ml,每天1次,连续5天。分别于雾化治疗第3天、第5天予无创肺功能仪检测气道高反应性;HE染色和PAS染色观察小鼠气道炎症变化;ELISA法检测小鼠BALF中IL-9、OVA-IgE浓度水平;流式细胞术检测肺 γδTCR+CD 3+、IL-9+CD3+、IL-10+CD3+、IL-9+yδTCR+、IL-10+γδTCR+淋巴细胞百分数;荧光定量PCR法测定肺IL-9R mRNA水平。结果:与正常对照组（A）相比,哮喘治疗前（B0）气道炎症明显;气道反应性明显增高（P<0.05）;BALF中IL-9、OVA-IgE浓度明显增高（P<0.01,P<0.001）;γδTCR+CD3+、IL-9+γδTCR+、IL-9+ CD3+淋巴细胞百分数明显高于正常对照组（P值均<0.001）,IL-10+CD3+淋巴细胞百分数低于A组（P<0.05）,而IL-10+yδTCR+淋巴细胞百分数与A组无差异（P>0.05）;肺IL-9R mRNA水平明显高于正常对照组（P<0.05）。B3组气道炎症病变较B0减轻;B3组肺IL-9+CD3+、IL-9+yδTCR+淋巴细胞百分数均明显低于B0组（P<0.0001、P<0.01）,IL-10+CD3+淋巴细胞明显高于 B0 组（P<0.0001）;B5组气道炎症较B3组加重;BALF中IL-9浓度明显低于B0组（P<0.05）,IL-9+CD3+、IL-9+yδTCR+淋巴细胞百分数均明显低于B0组（P<0.0001、P<0.05）,IL-10+CD3+淋巴细胞明显高于B0组（P<0.05）;C3、C5组上述指标与B0组比较无差异（P值均>0.05）。肺IL-9R mRNA水平B3、B5组与BO组无差异,明显低于C3、C5组（P值均<0.0001）。结论:实验剂量的微卡雾化吸入可减轻哮喘气道炎症,Th9细胞在其中发挥着重要作用,Th9细胞及γδT细胞均参与其过程,其机制可能是通过诱导γδT细胞分泌IL-10增多、抑制γδT细胞分泌IL-9减少、γδT细胞呈IL-10优势表达而发挥作用,γδT细胞可能是Th9细胞家族成员之一。但微卡反复雾化吸入可加重哮喘气道炎症,微卡可能扮演着抗原的角色。第二部分 雾化吸入母牛分枝杆菌防治小鼠肺呼吸道合胞病毒感染及对Th9细胞功能的影响第一节雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠肺呼吸道合胞病毒感染及对Th9细胞功能的影响目的:观察母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠肺呼吸道合胞病毒感染的预防作用及对Th9细胞功能的影响方法:72只雌性Balb/c小鼠按随机数字表法按时-效、量-效关系研究分组。时-效关系分为6组:正常对照组（N）、RSV感染组（C6）、微卡干预组（Wneb、Wi.p、Mneb、Mip）,量-效关系分为7组:正常对照组（N）、RSV感染组（C6、C5）、微卡干预组（Wneb16、Wneb36、Wneb15、Wneb35）。时效关系研究:Wneb予微卡雾化吸入1周后感染106PFU RSV;Wi.p予微卡腹腔注射1周后感染106PFURSV;Mneb予微卡雾化吸入1月后感染106PFURSV;Mip予微卡腹腔注射1月后感染106PFU RSV,RSV感染后第4天予无创肺功能仪监测气道反应性,处死小鼠。量效关系研究:C6、Wneb16、Wneb36组感染106PFURSV;C5、Wneb15、Wneb35 组感染 105PFU RSV,每天 1 次,连续 3天,第4天Wneb16、Wneb15组予微卡1支雾化吸入,每天1次,连续5天;Wneb36、Wneb35组予微卡3支雾化吸入,每天1次,连续5天,微卡最后1次吸入后予无创肺功能仪监测气道反应性,处死小鼠。所有小鼠予电镜观察肺部RSV感染情况;HE染色观察气道炎症反应;免疫荧光观察肺抗RSV表达;ELISA 监测 BALF 中 IL-9 浓度;免疫组化监测肺 EGFR、NF09、Acetylcholine含量;荧光定量 PCR 监测 IL9R、PU.1、PD-L2、JAK1、STAT1、STAT5A、RSV、IFN-y、TLR7、TLR8 mRNA 表达;流式细胞术检测 IL-9+ CD3+、IL-10+CD3+淋巴细胞百分数。结果:①C6组小鼠气道反应性较正常对照组明显增高（P<0.05）,微卡腹腔注射1个月或1周均能降低气道反应性（P<0.05）,微卡雾化吸入对气道反应性无影响。②RSV感染可导致气道炎症,C6组炎症重于C5组;微卡雾化吸入可导致气道炎症,与剂量相关,Wneb36组气道炎症重于Wneb16组;微卡腹腔注射（Wi.p、Mi.p）均可减轻气道炎症,与时间无关。③C6、C5组BALF中IL-9浓度均明显增高（P值均<0.05）;Mneb、Mi.p较C6组明显降低（P值均<0.01）;Wneb16组较C6组明显降低（P<0.05）。④免疫荧光:IOD值C6、C5组均明显高于正常对照组（P<0.01,P<0.0001）;C6组明显高于C5 组（P<0.01）;Wneb、Wi.p、Mneb.、Mi.p组 IOD 值较C6组明显降低（P值分别<0.01,<0.01,<0.05,<0.01）;Wneb组较Mneb组、Wi.p 组明显降低（P<0.05,P<0.001）,Wi.p组明显高于Mi.p组（P<0.001）;Mi.p组较Mneb组明显降低（P<0.05）;Wneb16、Wneb36组均明显低于 C6 组（P 值均<0.01）;Wneb36 明显高于 Wneb16（P值<0.01）;Wneb15、Wneb35 组均明显低于 C5 组（P 值均<0.0001）。⑤电镜:C6组肺泡间质可见大量RSV;Wneb16组未见病毒;C5组及其它微卡干预组均可见少量RSV。⑥免疫组化:C6、C5组EGFR、NF09、Acetylcholine IOD值均明显高于正常对照组（P值均<0.0001）;肺EGFR表达IOD值Wneb、Wi.p、Wneb16组均明显低于C6组（P值均<0.0001）;Wneb15组明显低于 C6 组（P<0.0001）;肺 NF09 表达 IOD值Wneb、Wneb16、Wneb36组均明显低于C6组（P值均<0.001）;Wneb15、Wneb35组均明显低于C5组（P<0.0001）;肺Acetylcholine表达IOD值Wneb16组明显低于C6组（P值均<0.0001）;Wneb15、Wneb35组均明显低于C5组（P<0.0001）。⑦荧光定量PCR:IL-9R mRNAC6、C5组与正常对照组及各干预组间比较无差异;PU.1 mRNA水平C6、C5组均较正常对照组增高（P<0.0001,P<0.05）,Wneb、Wneb36、Wi.p组较C6组均降低（P<0.0001,P<0.001,P<0.001）;PD-L2 mRNA水平C6组较正常对照组降低（P<0.05）,Mi.p组较C6组明显降低（P<0.05）;JAK1 mRNA水平C6感染组较正常对照组明显降低（P<0.05）,Wneb.、Wi.p、Mneb.、Mi.p组较RSV感染组均无明显差异,Wneb36、Wneb15、Wneb35分别较C6、C5、C5 组明显增高（P<0.05,P<0.01,P<0.0001）;STAT1 mRNA 水平C6、C5组较正常对照组无明显差异,Wneb15、Wneb35均较C5组增高（P<0.05,P<0.01）;STAT5A mRNA水平C6、C5组均较正常对照组明显降低（P<0.0001、P<0.001）,Wneb16、Wneb36 较 C6 组明显增高（P<0.001,P<0.0001）,Wneb15、Wneb35均较 C5 组明显增高（P值均<0.01）;RSV mRNA水平C6、C5组较正常对照组明显增高（P<0.01,P<0.05）,Wneb、Wi.p、Mneb、Mi.p 均较 C6 组明显降低（P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05）,Wneb16、Wneb36均较C6明显降低（P<0.01,P<0.05）,Wneb15较C5组明显降低（P<0.01）。IFN-γmRNA水平C6、C5组较正常正常对照组、各干预组较C6、C5组间均无显着性差异（P值均>0.05）。TLR7 mRNA水平C6组较正常对照组明显增高（P<0.0001）,Wi.p、Mneb、Mi.p较C6组均明显增高（P<0.001,P<0.001,P<0.0001）,Wneb16、Wneb36 均较 C6 组明显降低（P 值均<0.0001）,C5组较正常对照组明显降低（P<0.001）,Wneb15、Wneb35较C5组无明显差异（P值均>0.01）。TLR8 mRNA水平C6感染组较正常对照组明显降低（P<0.001）,Wneb、Wi.p、Mneb、Mi.p较 C6 组均明显增高（P<0.0001,P<0.001,P<0.001,P<0.0001）,Wneb16、Wneb36均较C6组明显增高（P值均<0.0001）,C5组较正常对照组明显增高（P<0.0001）,Wneb35较C5组增高（P<0.01）。⑧流式细胞术:IL9+CD3+淋巴细胞百分数C6组明显高于正常对照组（P<0.05）,Wi.p、Mi.p组明显低于C6组（P值均<0.001）,Mneb、Wneb36明显高于C6组（P<0.05,P<0.0001）。IL10+CD3+淋巴细胞百分数C6组与正常对照组相比无差异,Wi.p、Mi.p较C6组明显增高（P<0.05,P<0.001）。IL9+D3+淋巴细胞百分数C5组与正常对照组无明显差异,Wneb15、Wneb35组均明显高于C5组（P<0.05,P<0.01）,IL10+CD3+淋巴细胞百分数C5组与正常对照组无明显差异,Wneb15较C5组明显增高（P<0.0001）。结论:微卡可用于RSV预防,Th9细胞在其中发挥着重要作用,微卡预防RSV感染的机制包括:①调控PU.1及PD-L2,调节Th9细胞功能,降低IL-9水平、增加IL-10水平发挥抗炎作用;调IL-9信号通路STAT1、STAT5A水平,调控下游基因表达,发挥抗病毒作用;②活化TLR7、TLR8发挥抗病毒作用,在其中扮演着TLR7、TLR8激动剂的作用;③下调气道NF09、Acetylcholine表达,通过调节神经机制发挥作用;④下调肺内EGFR表达,抑制RSV感染。第二节雾化吸入母牛分枝杆菌治疗小鼠肺呼吸道合胞病毒感染及对Th9细胞功能的影响目的:观察母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠肺呼吸道合胞病毒感染的治疗作用及对Th9细胞功能的影响方法:18只雌性Balb/c小鼠按随机数字表法分为3组:正常对照组（Normal group）、RSV 感染组（RSV group）、微卡治疗组（Treat group）。感染组与治疗组滴鼻感染106PFU RSV,每天1次,连续3天,第4天RSV感染组予PBS液雾化吸入、微卡治疗组雾化吸入母牛分枝杆菌,每天1次,连续5天。微卡最后1次吸入后24小时内予无创肺功能仪监测气道反应性,处死小鼠。所有小鼠予电镜观察肺部RSV感染情况;HE染色观察气道炎症反应;免疫荧光观察肺抗RSV表达;ELISA监测BALF中IL-9浓度;免疫组化监测肺EGFR、NF09、Acetylcholine含量;荧光定量PCR监测IL9R、PU.1、PD-L2、JAK1、STAT1、STAT5A、RSV、IFN-γ、TLR7、TLR8 mRNA表达;流式细胞术检测 IL-9+CD3+、IL-10+CD3+、γδTCR+CD3+、IL-9+γδTCR+、IL-1 0+γδTCR+淋巴细胞百分数。结果:①RSV感染组小鼠气道反应性较正常对照组明显增高（P<0.05）,微卡雾化吸入治疗组能显着降低气道反应性（P<0.05）②RSV感染可导致明显气道炎症,微卡雾化吸入治疗组可减轻气道炎症。③RSV感染组BALF中IL-9浓度明显高于正常对照组（P<0.05）,微卡治疗组较RSV感染组无显着性差异。④免疫荧光:IOD值RSV感染组明显高于正常对照组（P<0.01）,微卡治疗组较RSV感染组明显降低（P<0.0001）。⑥电镜:RSV感染组肺泡间质可见大量RSV,微卡治疗组未见病毒。⑦免疫组化:RSV感染组EGFR、NF09、Acetylcholine IOD值均明显高于正常对照组（P值均<0.0001）,微卡治疗组EGFR、Acetylcholine IOD值明显低于RSV感染组（P<0.01,P<0.0001）,NF09 IOD值较RSV感染组无显着性差异。⑧荧光定量PCR:IL-9R mRNARSV感染组与正常对照组无差异,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染组降低（P<0.01）;PU.1 mRNA水平RSV感染组较正常对照组增高（P<0.0001）,微卡雾化吸入组较RSV感染组明显降低（P<0.0001）;PD-L2 mRNA水平RSV感染组较正常对照组降低（P<0.05）,微卡雾化吸入治疗组与RSV感染组比较无显着性差异;JAK1 mRNA水平RSV感染组较正常对照组明显下降（P<0.05）,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染组明显增高（P<0.0001）;STAT1 mRNA水平RSV感染组较正常对照组无明显差异,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染组明显增高（P<0.001）;STAT5A mRNA水平RSV感染组较正常对照组明显降低（P<0.0001）,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染对照组明显增高（P<0.0001）;RSV mRNA水平RSV感染组较正常对照组明显增高（P<0.01）,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染对照组明显降低（P<0.01）;IFN-y mRNA水平RSV感染组较正常正常对照组无显着性差异（P>0.05）,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染对照组明显降低（P<0.05）;TLR7 mRNA水平RSV感染组较正常对照组明显增高（P<0.0001）,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染组明显增高（P<0.0001）;TLR8 mRNA水平RSV感染组较正常对照组明显降低（P<0.001）,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染对照组明显增高（P<0.05）。⑨流式细胞术:RSV感染组γδTCR+CD3+淋巴细胞百分数较正常对照组明显减少（P<0.05）,微卡雾化吸入治疗组较RSV感染组明显增多（P<0.01）;IL-9+CD3+、IL-9+γδTCR+淋巴细胞百分数RSV感染组较正常对照组明显增高（P<0.05,P<0.01）,IL-10+CD3+、IL-10+yδTCR+淋巴细胞百分数RSV感染组与正常对照组无显着性差异;微卡雾化吸入治疗组IL-9+CD3+较RSV感染组明显下降（P<0.01）,但IL-9+γδTCR+淋巴细胞百分数较RSV感染组无显着性差异;IL-10+CD3+、IL-1O+γδTCR+淋巴细胞百分数微卡雾化治疗组与RSV感染组无显着性差异。结论:实验剂量的微卡雾化吸入可明显降低气道反应性、减轻气道炎症、降低肺RSV感染及RSV mRNA表达,小剂量微卡雾化吸入可用于RSV的治疗,Th9细胞、γδT细胞在其中发挥着重要作用。微卡雾化吸入治疗RSV的机制包括:①调控PU.1,降低IL-9水平,调节Th9细胞功能;上调IL-9信号通路STAT1、STAT5A水平,调控下游基因表达,发挥抗病毒作用;②活化TLR7、TLR8发挥抗病毒作用,微卡在其中扮演着TLR7、TLR8激动剂的作用;③下调气道Acetylcholine表达,通过调节神经机制发挥作用;④下调肺内EGFR表达,抑制RSV感染;⑤募集γδT细胞参与抗病毒过程。第三部分 正常Balb/c小鼠肺功能测定目的:测定正常Balb/c小鼠肺功能,为广大研究人员提供参考。方法:300只Balb/c小鼠按体重和性别分为六组（AF组,雌性,体重16～20克;AM组,雄性,体重16～20克;BF组,雌性,体重20～24克;BM组,雄性,体重20～24克;CF组,雌性,体重24～28克;CM组,雄性,体重24～28克）,清醒状态下予美国BUXCO公司无创肺功能仪TBL4500 FinePointe NAM 系统测定如下指标:f、TV、MV、sRaw、sGaw、Raw、Frc、R2、PIF、PEF、Ti、Te、Dt、Rpef、EF50、Rinx。并行各参数间相关性分析。结果:组间比较参数 TV、MV、Frc、R2、PIF、PEF、Rpef、EF50 和 Rinx有显着性差异,而f、sRaw、sGaw、Raw、Ti、Te和Dt无显着性差异。相关性分析发现性别与W、Frc、R2、Rpef相关;W与TV、MV、sRaw、Frc、PIF、PEF、Rpef、EF50、Rinx 正相关;f 与 TV、MV、R2、PIF、PEF、Rpef、EF50、Rinx 正相关,但与 sRaw、sGaw、Raw、Ti、Te、Dt 负相关结论:各组小鼠肺功能各指标存在显着性差异,实验用小鼠的选择应根据实验目的参考选择,以减少实验误差。
孙欢欢,王东方[5]（2015）在《变态反应性鼻炎中医证型与白介素-2受体的相关性研究进展》文中研究指明目的探讨变态反应性鼻炎的中医证型与白介素-2受体的相关性,为临床中医辨证提供客观指标。方法对相关文献进行提炼,并归类整理。结果变应性鼻炎的客观免疫指标IL-2R与中医证型肺经伏热、肾阳不足、脾气虚弱、肺气虚寒有一定的相关性。结论研究变应性鼻炎患者的临床表现及体征,观察IL-2受体与中医证型之间的关系,寻找有助于临床辨证的客观化指标。
李四维[6]（2014）在《芪味理肺汤调控转录因子活化蛋白-1（AP-1）治疗支气管哮喘的机制研究》文中研究指明芪味理肺汤调控转录因子活化蛋白-1（AP-1）治疗支气管哮喘的机制研究目的：1.通过稳定复制的SD大鼠支气管哮喘模型进行给药动物实验,证实AP-1是支气管哮喘发病的关键环节,验证芪味理肺汤治疗支气管哮喘的疗效并获取该方疗效的模式动物学证据。2.通过分子生物学方法等手段检测AP-1上下游因子的含量,完善芪味理肺汤治疗支气管哮喘的作用机理,探索该方调控AP-1治疗支气管哮喘的具体作用环节。方法：70只SPF级SD大鼠适应性喂养7d无异常后,随机分为空白对照组、模型对照组、阻断剂组、中药低、中、高剂量组、西药组7组。阻断剂组先经AP-1的抑制剂姜黄素预处理3d （100mg. kg-1. d-1,50mg/ml×0.2mlBid腹腔注射给药）,而后与模型对照组、中药低、中、高剂量组和西药组一起,于d1、d8以五点（腹腔、左右后脚趾、左右腹股沟皮下）注射10%OVA/Al （OH）3+0.0023‰百日咳类毒素混合液共lml（每处0.2m1）致敏；从d15开始用1%OVA生理盐水雾化吸入激发,每天一次,30min/次,共激发7d。空白对照组予等量生理盐水五点注射及雾化激发。于d9（即末次五点注射完成后）开始进行灌胃,给药组动物每日灌胃一次,共灌胃14d。其中,中药低、中、高剂量组每日分别予以浓度为0.182g/ml、0.363g/ml、0.727g/ml的浸膏水溶液3ml灌胃（即低剂量组每日灌药量为中剂量组的1/2,高剂量组每日灌药量为中剂量组的2倍）；西药组每日予以地塞米松溶液50μg/ml3ml灌胃。空白对照组、模型对照组和阻断剂组每日给予等量生理盐水。给药结束后各组大鼠行麻醉下肺功能检测,而后采取支气管肺泡灌洗液、动脉血及肺组织标本。分别用于嗜酸性粒细胞计数；血清IgE、IL-4、IL-5、IL-13检测；组织切片HE染色及免疫组化染色法检测AP-1核蛋白；组织匀浆液RT-PCR法及Western blot法分别检测AP-1核蛋白和mRNA.采用SPSS17.0统计软件：计量资料以均数±标准差（x±s）表示,计数资料如符合正态分布则也以均数±标准差（x±s）表示,如果不符合正态分布,则用中位数±四分位间距（Md±QR）来表示。多组间比较首先采用非参数检验的单样本K-S拟合优度检验（1-Sample K-S Test）进行正态性检验,如符合或近似符合正态分布,使用单因素方差分析（One-way ANOVA）,方差齐使用LSD法进行多重比较,方差不齐使用Tamhane’sT2法进行多重比较分析；如果不符合正态分布,则进行数据转化如对数转换等,如数据转换后仍不符合正态分布,采用非参数检验Kruskal-Wallis法进行多重比较,以P<0.05为有统计学差异,P<0.01为有显着统计学差异。结果：1.模型判定及疗效指标的观察与检测结果：一般情况：造模操作后,模型对照组、中药低、中、高剂量组、西药组出现哮喘阳性症状,正常对照组和阻断剂组无阳性表现。肺功能检测结果：与空白对照组相比,模型对照组气道高反应性（I）、组织迟滞（H）、组织阻尼（G）、动态顺应性（Cr s）较高,但P>0.05,差异无统计学意义；其余各组各组气道高反应性（Ⅰ）、组织迟滞（H）均高,其中阻断剂阻气道高反应性值最低,但P均>0.05,差异无统计学意义,余深吸气量（IC）、中心气道阻力（Rn）、组织阻尼（G）、动态顺应性（Crs）、静态顺应性（Cst）等指标,各组间趋势不一,P均>0.05,差异无统计学意义。支气管肺泡灌洗液（BALF）涂片镜下可见嗜酸性粒细胞（EOS）,初步观察其数量从高到低依次为模型对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、西药组、阻断剂组、空白对照组。对其进行计数,结果为：与空白对照组相比,模型对照组BALF涂片EOS计数显着升高（P<0.01）；阻断剂组EOS计数稍高,但P>0.05,差异无统计学意义；中药低、中、高剂量组EOS计数升高（P<0.01）,且显示出量效关系；西药组EOS计数升高（P<0.01）。与模型对照组相比,阻断剂组EOS计数较低（P<0.01）,中药低、中、高剂量组EOS计数也低,但中药低剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药中、高剂量组P<0.01；西药组EOS计数较低（P<0.01）。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组EOS计数较高（P<0.01）；西药组EOS计数也高但P>0.05,差异无统计学意义。与西药组相比,中药低、中、高剂量组EOS计数均高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药低、中剂量组P<0.01。肺组织切片HE染色镜下观察可见空白对照组未见炎性细胞浸润,且肺泡、支气管黏膜上皮结构完整清晰,支气管无痉挛；阻断剂组可见少量炎性细胞浸润,肺内结构尚完整清晰,未见支气管痉挛；余模型对照组、中药低、中、高剂量组和西药组均可见肺组织炎性细胞浸润,支气管黏膜上皮细胞排列紊乱、成片脱落,肺泡间隔增厚,支气管痉挛等典型支气管哮喘病理表现,但病理损害轻重程度不同。对其进行组织损伤及炎症病理学评分示：在项目炎性细胞浸润方面,得分从高到低依次是模型对照组=中药低剂量组>中药中剂量组=中药高剂量组>西药组>阻断剂组=空白对照组；在项目支气管上皮细胞脱落方面,得分从高到低依次是模型对照组>中药低剂量组=中药中剂量组>中药高剂量组=西药组>阻断剂组=空白对照组；在项目肺泡间隔增厚方面,得分从高到低依次是模型对照组=中药低剂量组>中药中剂量组>中药高剂量组=西药组>阻断剂组=空白对照；在项目支气管痉挛方面,得分从高到低依次是模型对照组=中药低剂量组>中药中剂量组=中药高剂量组>西药组>阻断剂组=空白对照；总分得分从高到低依次是模型对照组>中药低剂量组>中药中剂量组>中药高剂量组>西药组>阻断剂组>空白对照组。以上P值均<O.01。血清IgE检测结果：与空白对照组相比,各组血清IgE均升高（P<0.01）,中药低、中、高剂量显示出量效关系。与模型对照组相比,阻断剂组血清IgE较低（P<0.01）,中药低、中、高剂量组血清IgE也低,但中药低剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药中、高剂量组P<0.05；西药组血清IgE较低（P<0.01）。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组血清IgE较高（其中中药低剂量组P<0.05,中药中、高剂量组P<0.01）；西药组血清IgE也高但P>0.05,差异无统计学意义。与西药组相比,中药低、中、高剂量组血清IgE均高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药低剂量组P<0.05、中药中剂量组P<0.01。2.AP-1实时荧光定量RT-PCR检测AP-1mRNA表达量结果：c-jun mRNA表达量：与空白对照组相比,各组c-jun的表达量均较高,其中模型对照组及中药低、中剂量组P<0.05,余组P值均>0.05,差异无统计学意义。与模型对照组相比,中药低剂量组c-jun的表达量略高,其余各组均低,其中,阻断剂组P<0.05,余组P值均>0.05,差异无统计学意义。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组及西药组c-jun的表达量均较高,其中西药低、中剂量组P<0.05,余组P值均>0.05,差异无统计学意义。与西药组相比,中药低、中、高剂量组c-jun的表达量均高,但P>0.05,差异无统计学意义。c-fos mRNA表达量：与空白对照组相比,各组c-fos的表达量均较高,但P值均>0.05,差异无统计学意义。与模型对照组相比,各组c-fos的表达量均较低,但P值均>0.05,差异无统计学意义。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组及西药组c-fos的表达量均低,但P值均>0.05,差异无统计学意义。与西药组相比,中药低、中剂量组c-fos的表达量均高,但P>0.05,差异无统计学意义。3.AP-1组成成分含量及活性变化的检测结果：①肺组织病理切片免疫组织化学染色检测AP-1核蛋白c-Jun和c-Fos结果：镜下初步观察各组间c-Jun蛋白阳性表现强度从高到低依次为：模型对照组、中药低、中、高剂量组、西药组、阻断剂组、空白对照组,c-Fos蛋白阳性表现强度从高到低依次为：模型对照组、阻断剂组、中药低、中、高剂量组、西药组、空白对照组。阳性表现主要分布于支气管上皮细胞,肺泡间隔中也可见。各组c-Jun积分光密度均较空白对照组高且P<0.01,其中,中药低、中、高剂量组显示出量效关系。与模型对照组相比,阻断剂组c-Jun积分光密度较低（P<0.01）；中药低、中、高剂量组c-Jun积分光密度也低,其中中药低剂量组P<0.05,中药中、高剂量组P<0.01；西药组c-Jun积分光密度较低（P<0.01）。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组及西药组c-Jun积分光密度较高（P<0.01）。与西药组相比,中药低、中、高剂量组c-Jun积分光密度均高,但P>0.05,差异无统计学意义。各组c-Fos积分光密度均较空白对照组高且P<0.01,其中,中药低、中、高剂量组显示出量效关系。与模型对照组相比,各组积分光密度较低,其中阻断剂组略低但P>0.05,差异无统计学意义,中药低剂量组P<0.05,其余组P<0.01。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组及西药组c-Fos积分光密度较低,其中西药组P<0.05,其余组P>0.05,差异无统计学意义。与西药组相比,中药低、中、高剂量组c-Fos积分光密度均高,但P>0.05,差异无统计学意义。②组织匀浆Western blot检测肺组织中AP-1核蛋白c-Jun与c-Fos结果：初步观察β-actin表达基本一致,c-Jun蛋白各组间表达从高到低依次为模型对照组、中药低、中、高剂量组、西药组、阻断剂组、空白对照组,c-Fos蛋白各组间表达从高到低依次为模型对照组、阻断剂组、中药低、中、高剂量组、西药组、空白对照组。各组c-Jun平均灰度值均较空白对照组高且P均<0.01,其中,中药低、中、高剂量组显示出量效关系。与模型对照组相比,阻断剂组c-Jun平均灰度较低（P<0.01）,中药低、中、高剂量组c-Jun平均灰度也低,但中药中、低剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药高剂量组P<0.01；西药组c-Jun平均灰度较低（P<0.01）。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组及西药组c-Jun平均灰度较高（P<0.01）。与西药组相比,中药低、中、高剂量组c-Jun平均灰度均高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药低、中剂量组P<0.01。各组c-Fos平均灰度值均较空白对照组高且P均<0.01,其中,中药低、中、高剂量组显示出量效关系。与模型对照组相比,阻断剂组、中药低、中、高剂量组及西药组c-Fos平均灰度均较低（P<0.01）。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组及西药组c-Fos平均灰度较高（P<0.01）。与西药组相比,中药低、中、高剂量组c-Fos平均灰度均高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药低、中剂量组P<0.01。4.相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的测定结果：与空白对照组相比,各组血清IL-4含量均高,中药低、中、高剂量显示出量效关系,其中,阻断剂组P>0.05,差异无统计学意义,其余组P<0.01。与模型对照组相比,各组血清IL-4较低（P<0.01）。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组及西药组血清IL-4较高（P<0.01）。与西药组相比,中药低、中、高剂量组血清IL-4均高,P<0.01。与空白对照组相比,各组血清IL-5含量均高,中药低、中、高剂量显示出量效关系,但仅有中药低、中剂量组P<0.01,其余各组P>0.05,差异无统计学意义。与模型对照组相比,各组血清IL-5较低（P<0.01）。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组血清IL-5较高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药中、低剂量组P<0.01；西药组血清IL-5也高但P>0.05,差异无统计学意义。与西药组相比,中药低、中、高剂量组血清IL-5均高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药低、中剂量组P<0.01。与空白对照组相比,各组血清IL-13含量均高,中药低、中、高剂量显示出量效关系,其中阻断剂组和中药高剂量组P<0.05,其余各组P<0.01。与模型对照组相比,各组血清IL-13较低,其中中药低剂量组P<0.05,其余各组P<0.01。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组血清IL-13较高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药中、低剂量组P<0.01；西药组血清IL-13也高（P<0.05）。与西药组相比,中药低、中剂量组较高（P>0.05）,差异无统计学意义,中药高剂量组则略低且P<0.01结论：1.本实验中建立的支气管哮喘大鼠模型是成功的,AP-1是支气管哮喘发病的关键环节。①SD大鼠支气管哮喘模型复制成功。采用五点（腹腔、左右后脚趾、左右腹股沟皮下）注射10%OVA/A1（OH）3+0.0023‰百日咳类毒素混合液致敏SD大鼠再行1%OVA生理盐水雾化吸入激发的方法可成功复制大鼠支气管哮喘模型。②姜黄素对支气管哮喘大鼠肺组织AP-1的表达阻断成功。各种实验手段检测AP-1基因表达产物mRNA和核蛋白含量及Th2细胞下游因子IL-4、 IL-5和IL-13含量：阻断剂组大鼠的c-jun mRNA和核蛋白含量以及IL-4、IL-5和IL-13表达情况接近于空白对照组而远低于模型对照组,c-fos mRNA和核蛋白含量接近于模型对照组而远高于空白对照组,该组大鼠AP-1表达阻断总体而言是成功的。③AP-1是支气管哮喘发病的关键环节。阻断剂组大鼠未呈现典型哮喘症状和体征,肺功能、BALF涂片EOS计数、肺组织病理切片HE染色、血清IgE值等实验室检查指标也无典型哮喘模型阳性表现。可以认为该组大鼠未成功复制支气管哮喘模型,提示AP-1是哮喘发病的关键环节,对其进行阻断可在一定程度阻止哮喘发病。2.芪味理肺汤通过对AP-1的表达及活性的调控,影响其下游细胞因子（IL-4、IL-5、 IL-13）的表达及活性,对支气管哮喘大鼠治疗显着有效。①芪味理肺汤治疗支气管哮喘大鼠有效。芪味理肺汤低、中、高剂量组大鼠BALF涂片EOS计数、肺组织病理切片HE染色、血清IgE值等实验室检查指标低于模型对照组而略高于西药组,其中高剂量组接近于西药组、低剂量组则接近于模型对照组。表明芪味理肺汤治疗支气管哮喘大鼠有效,且高剂量灌胃效果接近于西药激素地塞米松灌胃,而低剂量灌胃治疗可认为无效。OAP-1表达及活性受调情况。各实验手段检测AP-1基因表达产物mRNA和核蛋白含量,芪味理肺汤低、中、高剂量组三组间呈现量效差异,三组大鼠AP-1mRNA含量与模型对照组、西药组差异均无统计学意义,中药高剂量组大鼠的AP-1核蛋白含量接近于西药组,而中药低剂量组则近似于模型对照组。表明本实验结果尚不能明确芪味理肺汤对支气管大鼠肺组织内AP-1mRNA表达的影响,但可以降低AP-1核蛋白的含量,减少AP-1的合成。③AP-1下游细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）的表达情况。芪味理肺汤低、中、高剂量组的Th2细胞下游因子IL-4、IL-5和IL-13含量,三组间呈现量效差异,低剂量组大鼠情况接近于模型对照组而高剂量组则近似于西药组。初步推测芪味理肺汤可能是阻断了AP-1以mRNA为模板合成蛋白这一过程,使大鼠肺组织内的AP-1核蛋白（c-Jun、c-Fos）含量减少,AP-1总量减少,Th2细胞下游因子IL-4、IL-5和IL-13的合成因此受限,表现为IL-4、IL-5和IL-13含量降低。
陈柏源[7]（2014）在《火针干预对过敏性哮喘豚鼠Th1/Th2失衡的影响》文中认为目的：通过检测火针干预对过敏性哮喘豚鼠模型IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ、T淋巴细胞变化及病理形态结构的影响,初步探讨火针干预对过敏性哮喘豚鼠Th1/Th2失衡的作用机制。方法：健康豚鼠40只,适应性喂养2天后随机分为空白组、模型组、火针组和地塞米松组,每组10只。出空白组外,其余各组均采用OVA致敏法造模。从第1天开始以10%卵蛋白溶液1ml,进行腹腔注射致敏,在第15天开始用1%卵蛋白溶液,进行雾化吸入,每次20min,连续两周,每天1次,直至各豚鼠均出现喘咳,躁动,呼吸频率变快,幅度增大,腹肌痉挛等症状时,则提示造模成功。造模成功后模型组不作干预治疗,西药组在雾化吸入前予地塞米松0.5mg/kg腹腔注射,火针组进行火针干预,实验结束后各组豚鼠进行取材,检测豚鼠血清中IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ、T淋巴细胞变化及病理形态结构的影响。实验结果采用SPSS18.0软件包进行分析统计结果：1.造模成功的豚鼠在进行干预治疗后与模型组比较,火针组、西药组都能显着升高血清中IL-2、INF-γ的含量（P<0.01,P<0.05）,并能能显着降低血清中IL-4、IL-10的含量（P<0.01,P<0.05）,其中火针组治疗后血清中IL-2、IL-4含量变化与模型组比较（P<0.01）,INF-γ、IL-10含量变化与模型组比较（P<0.05）,西药组治疗后血清中IL-2、IL-4含量变化与模型组比较（P<0.05）,INF-Y、IL-10含量变化与模型组比较（P<0.01）,均具有显着差异性；2.与模型组比较,火针组、西药组都能显着升高外周血中的CD+4（P<0.05）,降低CD+8含量（P<0.05）,其比值显着上升（P<0.05）,且火针组的干预效果更明显；3.相对于模型组,火针和西药组豚鼠的支气管一肺组织结构均较清晰,粘膜及粘膜下层充血、水肿明显减轻。结论：1.火针干预可能是通过影响Thl/Th2对效应细胞因子（如白细胞介素群,干扰素群等）的分泌,从而对Thl/Th2代谢失衡起到一定的调节作用。2.火针干预通过对CD+4,CD+8T细胞的调节产生体液免疫及抑制作用,从而进一步对TH1/TH2失衡机制产生调节作用。3.通过火针干预对豚鼠支气管—肺组织结构相对于模型组的清晰程度,可知其能明显减轻粘膜及粘膜下层充血、水肿,从而对TH1/TH2失衡机制产生进一步调节作用。
刘金环[8]（2012）在《健脾理肺方对哮喘大鼠的免疫调节作用》文中研究表明目的：支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病,目前认为气道炎症、气道高反应性、气道重构、Th1/Th2失衡等在支气管哮喘的发病机制中起着重要作用。健脾理肺方为中医大师倪珠英治疗小儿哮喘缓解期的经验方,有健脾益气调肺之功。本课题采用卵蛋白（OVA）诱导建立SD大鼠哮喘模型进行实验研究,通过ELISA和Real-time-PCR实验技术,观察健脾理肺方对哮喘大鼠血清IgE. ICAM-1、 VCAM-1、 IFN-γ、IL-4和肺组织IL-5mRNA. GR-pmRNA的影响,以评价健脾理肺方对哮喘大鼠气道炎症、气道高反应性、气道重构及Th1/Th2失衡的影响,探讨健脾理肺方防治支气管哮喘的作用机制,为提高健脾理肺方治疗小儿哮喘的临床疗效提供依据,为中医药治疗小儿支气管哮喘提供可靠的实验和理论依据。方法：将50只大鼠按体重随机分为五组,每组10只,A组为正常对照组（即空白组）；B组为哮喘模型组（即模型组）；C组为中成药玉屏风散对照组（即玉屏风组）；D组为西药地塞米松对照组（即激素组）；E组为中药健脾理肺方治疗组（即治疗组）。哮喘大鼠动物模型的建立采用卵蛋白致敏激发法。指标：主要通过ELISA试剂盒测定实验大鼠血清IgE、ICAM-1、 VCAM-1、 IFN-γ和IL-4的含量,通过实时定量-聚合酶链式反应（Real-time-PCR）检测实验大鼠肺组织IL-5mRNA、GR-βmRNA的表达水平,观察大鼠肺组织病理形态学方面的改变。结果：1.对哮喘大鼠血清IgE的影响模型组与空白组比较,IgE水平明显增高,统计学有显着差别（P<0.01）；治疗组和地塞米松组IgE水平与模型组相比明显降低,差别有显着意义（P<0.01）,与玉屏风组相比亦有显着差异（P<0.01）；治疗组与地塞米松组相比无显着差异（P=0.58）。2.对哮喘大鼠血清IL-4和IFN-γ的调节作用模型组的IL-4较空白组明显增高,而IFN-γ明显降低,差异有显着意义（P<0.05）；与模型组相比,治疗组和地塞米松组的IL-4水平明显降低、IFN-γ水平明显升高,有显着差别（P<0.05）；治疗组与地塞米松组比较IL-4和IFN-γ的平均值均相差不大,无显着差异（P=0.63,P=0.26）；治疗组与玉屏风组相比,IL-4明显偏低,IFN-γ明显偏高,且差别有显着意义（P<0.05）。3.对哮喘大鼠血清ICAM-1和VCAM-1的影响模型组与空白组相比大鼠血清ICAM-1和VCAM-1的水平明显增高,差异有显着意义（P<0.05）；与模型组相比,治疗组、地塞米松组和玉屏风组的ICAM-1和VCAM-1水平明显降低,有显着差别（P<0.05）；治疗组与地米组相比无显着差异（P=0.28,P=0.87）；治疗组与玉屏风组相比,ICAM-1和VCAM-1的水平明显偏低,差别有显着意义（P<0.05）。4.对哮喘大鼠肺组织IL-5mRNA的影响模型组大鼠肺组织的IL-5mRNA较空白组明显增高,差异有显着意义（P<0.05）；与模型组相比,治疗组和地塞米松组的IL-5mRNA水平明显降低,有显着差别（P<0.05）；治疗组的IL-5mRNA表达水平较地塞米松组更低,差别有显着意义（P<0.05）；治疗组与玉屏风组相比,IL-5mRNA偏低,但差别无显着意义（P=0.46）。5.对哮喘大鼠肺组织GR-βmRNA的影响模型组的GR-βmRNA较空白组明显降低,差异有显着意义（P<0.05）；与模型组相比,治疗组的GR-βmRNA水平明显升高,有显着差别（P<0.05）；与地塞米松组、玉屏风组相比,治疗组GR-βmRNA表达水平更高,差别有统计学意义（P<0.05）。6.对哮喘大鼠肺组织病理形态的改变经健脾理肺方干预的哮喘大鼠肺组织病理形态图与模型组相比,气管管壁结构逐渐恢复,炎症减轻,水肿明显消失,管腔炎性渗出物明显减少,黏膜上皮逐渐修复,豁膜下层水肿明显减轻,管腔基本恢复正常。结论：1.采取卵蛋白致敏激发法可以成功建立哮喘大鼠模型。2.健脾理肺方可能有调节哮喘大鼠Th1/Th2平衡的作用,同时可以缓解气道炎症、抑制嗜酸性粒细胞的聚集,并可抑制气道高反应性及气道重构,还可以促进GR与糖皮质激素结合的能力。
左琳,张念志[9]（2011）在《中医药防治支气管哮喘实验研究进展》文中研究说明支气管哮喘是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病[1]。是临床常见、多发病,该病难以根治且易反复发作。中医药在治疗支气管哮喘方面疗效显着,其实验研究方面也有较大进展。本文参阅了近年来国内有关中医药治疗支气管哮喘实验相关文献,从气道炎症、气道重塑、
向希雄[10]（2009）在《畅肺防喘方对哮喘大鼠气道重构和炎症介质的影响的试验研究》文中指出目的畅肺防喘方是课题组多年来治疗哮喘的经验方,应用于临床疗效显着,该方能有效缓解患者支气管痉挛,提高患者生活质量。其免疫作用已有初步探索。本课题拟在前期临床观察和实验研究的基础上,进一步从分子生物学和免疫学水平,研究畅肺防喘方防治哮喘的作用机制。本课题通过体外实验,运用血清药理学方法,研究该方对支气管平滑肌细胞的抑制增殖作用;并通过体内实验,观察该方对哮喘模型大鼠的平喘作用和对其支气管、肺组织形态学的影响,研究其血液、肺泡灌洗液中EOS（嗜酸性粒细胞）、IgE及相关趋化因子Eotaxin（嗜酸性粒细胞趋化蛋白）、ICAM-1（细胞间粘附分子-1）表达水平的变化。进一步从细胞和分子生物学水平探讨畅肺防喘方治疗哮喘的作用机理,从而为开发临床防治哮喘的有效中药制剂奠定基础。方法1、体内实验方法:取大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞计数和分类,对其上清液以双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）法进行细胞因子Eotaxin、ICAM-1含量的测定;血细胞计数分类,放免法检测血中IgE含量;制备大鼠支气管及肺组织切片,HE染色,观察气道重构情况;免疫组化法检测肺及支气管局部组织Eotaxin、ICAM-1的表达。2、体外实验方法:含药血清制备;MTT酶标法、免疫细胞化学（ICC）法测支气管平滑肌细胞的增殖水平,以了解该方对抗哮喘气道重构的作用。结果1、体内试验:1.1实验结果显示畅肺防喘方可显着降低WBC数量,尤其是嗜酸性细胞（P<0.01）,说明该方可明显改善呼吸道炎性症状。实验结果还表明血清IgE的含量降低,说明其治疗和预防作用可能是通过此途径来实现的,为畅肺防喘方治疗支气管哮喘的临床应用提供了有力的实验依据。1.2 ELISA法结果显示:与正常组比较模型组支气管肺泡灌洗液中Eotaxin、ICAM-1均显着升高,经治疗后,上述指标均显着降低。说明畅肺防喘方可显着抑制哮喘大鼠Eotaxin、ICAM-1表达。前期研究表明,该方对EOS的抑制作用较为明显。EOS浸润是哮喘炎症的显着病理生理特征,EOS向炎症部位趋化、募集,是哮喘病症中重要的病理过程,其过程机制与Eotaxin、ICAM-1等关系密切。结果提示,对Eotaxin、ICAM-1的抑制作用可能是畅肺防喘方治疗哮喘的作用机制之一。1.3肺组织病理切片HE染色显示,抗原激发后模型组肺组织嗜酸性粒细胞和炎症细胞浸润与对照组相比有明显增多（P<0.01）。2、体外实验:本实验发现畅肺防喘方高、中、小剂量组含药血清对支气管平滑肌增殖细胞核抗原（PCNA）表达的平均光密度明显高于对照组（P<0.05）,与地塞米松组无显着性差异（P>0.05）,它与MTT法观察结果一致。本次实验证明,与对照组比较,畅肺防喘方高、中剂量含药血清组能明显抑制大鼠支气管平滑肌细胞（ASMC）的增殖,与地塞米松含药血清组比较无显着性差异,而畅肺防喘方小剂量含药血清组则无明显作用,考虑可能与药物浓度有关。且随着作用时间的延长,含药血清对支气管平滑肌细胞的抑制作用有增强趋势。说明畅肺防喘方可能通过抑制组胺（His）促ASMC增殖作用而达到防治哮喘的效果,且存在一定的剂量、时间依赖关系。结论1、体内实验:证实了畅肺防喘方的平喘作用（症状改善,血中IgE、EOS,BALF中EOS含量下降,支气管及肺形态学的变化）和作用机制（抑制趋化因子Eotaxin和粘附分子ICAM-1的表达）。2、体外实验:运用血清药理学方法证实了畅肺防喘方有较好的抗哮喘大鼠气道重构的作用（抑制支气管平滑肌细胞增殖）和抑制平滑肌细胞的PCNA的作用。3、明确了宣肺平喘、清热化痰法对哮喘的防治作用机制。4、为进一步开发具有较好疗效的中药复方制剂,提供了实验依据。
二、喘安对哮喘大鼠可溶性白介素-2受体的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、喘安对哮喘大鼠可溶性白介素-2受体的影响（论文提纲范文）
（1）肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究 |
| 前言 |
| 1 支气管哮喘慢性持续期的免疫调控特征 |
| 2 支气管哮喘慢性持续期炎性因子与免疫调控的相互关系 |
| 3 免疫调控对支气管哮喘慢性持续期预后转归的影响 |
| 4 支气管哮喘慢性持续期免疫调控的临床需求 |
| 5 支气管哮喘慢性持续期免疫调控的临床局限与未来展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究 |
| 前言 |
| 1 支气管哮喘慢性持续期的中医观 |
| 2 支气管哮喘慢性持续期中医临床特征与免疫炎症的相关性 |
| 3 支气管哮喘慢性持续期中医病机演变与免疫调控的相互关系 |
| 4 中医干预对支气管哮喘慢性持续期炎性因子与免疫调控的作用 |
| 5 中医通过免疫调控影响支气管哮喘慢性持续期预后转归 |
| 6 支气管哮喘慢性持续期中医免疫调控的优势与特色 |
| 7 支气管哮喘慢性持续期中医免疫调控面临的问题与发展趋势 |
| 参考文献 |
| 第二部分 支气管哮喘慢性持续期“肺脾为核心脏腑整体辨证”理论研究 |
| 1 “脏腑整体辨证”观 |
| 1.1 整体观念 |
| 1.2 脏腑辨证 |
| 1.3 “脏腑整体辨证”的含义 |
| 2 “肺脾为核心脏腑整体辨证”观 |
| 2.1 支气管哮喘慢性持续期关键病机的共性规律特征 |
| 2.2 “肺脾为核心脏腑整体辨证”的含义 |
| 3 “温润辛金培本”原理方药的临床应用 |
| 3.1 “温润辛金培本”治则理论基础 |
| 3.2 “温润辛金培本”原理方药系列疗法 |
| 3.3 温润辛金培本原理内服方药 |
| 3.4 温润方 |
| 4 支气管哮喘慢性持续期“肺脾为核心脏腑整体辨证”与西医免疫调控的异同 |
| 4.1 免疫调控失衡的认识思路不同 |
| 4.2 免疫调控的方法有别 |
| 4.3 免疫调控的目的一致 |
| 5 “肺脾为核心脏腑整体辨证”继承与发展了中医解决支气管哮喘慢性持续期问题的优势与特色 |
| 参考文献 |
| 第三部分 肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究 |
| 研究一 基于RCT的肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期患者临床信息分析及血清标本收集 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二 肺脾为核心脏腑整体辨证治疗支气管哮喘慢性持续期调节免疫球蛋白水平的免疫调控机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究三 肺脾为核心脏腑整体辨证治疗支气管哮喘慢性持续期调节促炎ILs水平的免疫调控机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究四 肺脾为核心脏腑整体辨证治疗支气管哮喘慢性持续期调节抗炎ILs水平的免疫调控机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 特色与创新 |
| 3 问题与展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
| 附录 |
| 附件1 支气管哮喘慢性持续期实用性随机对照研究方案 |
| 附件2 试验过程的标准作业程序质量控制(即SOP管理) |
| 附件3 各中心血清采集及哮喘控制情况 |
（2）基于“天气通于肺”理论的支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠自噬功能及中药干预机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.“天气通于肺”的理论阐释 |
| 1.1 “天”字考源 |
| 1.2 “气”的考源 |
| 1.3 肺与天气相通 |
| 1.4 肺与其它脏腑的关系 |
| 2.雾霾的理论探析 |
| 2.1 雾霾是复杂的外感毒邪 |
| 2.2 烟草烟雾是有毒之邪气 |
| 3.哮喘的中医研究 |
| 3.1 哮喘的内涵研究 |
| 3.2 哮喘的病因病机 |
| 3.3 哮喘寒饮蕴肺证探析 |
| 结论 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 烟熏支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠模型的研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂、仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 造模方法 |
| 3.观察及检测指标 |
| 3.1 大鼠一般行为学检查 |
| 3.2 大鼠肺功能的检测 |
| 3.3 ELISA法检测细胞因子表达 |
| 4.统计学处理 |
| 5.结果 |
| 5.1 大鼠一般行为学检查 |
| 5.2 各组大鼠不同阶段体重变化 |
| 5.3 各组大鼠肺功能变化 |
| 5.4 各组大鼠血清中细胞因子含量变化 |
| 6.讨论 |
| 6.1 烟熏环境下支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠模型的建立 |
| 6.2 烟熏对哮喘寒饮蕴肺证大鼠肺功能的影响 |
| 6.3 烟熏对哮喘寒饮蕴肺证大鼠血清中炎性细胞因子的影响 |
| 实验二 烟熏支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠自噬相关基因研究以及中药干预机制 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 主要实验试剂、药品 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 造模方法 |
| 2.3 药物干预 |
| 2.4 观察及检测指标 |
| 3.统计学处理 |
| 4.结果 |
| 4.1 各组大鼠一般行为学观察 |
| 4.2 各组大鼠不同治疗阶段游泳时间比较 |
| 4.3 各组大鼠饮食和饮水量比较 |
| 4.4 各组大鼠不同治疗阶段肛温比较 |
| 4.5 各组大鼠不同治疗阶段体重变化比较 |
| 4.6 各组大鼠不同脏器重量比较 |
| 4.7 各组大鼠肺功能变化 |
| 4.8 各组大鼠血清中细胞因子表达 |
| 4.9 各组大鼠肺组织自噬基因Atg的表达 |
| 4.10 各组大鼠肺组织LC3和Beclin1 免疫印迹结果 |
| 4.11 各组大鼠透射电镜肺泡细胞超微结构 |
| 4.12 各组大鼠肺组织HE染色观察 |
| 5.讨论 |
| 5.1 哮喘与气道炎症反应 |
| 5.2 气道高反应性及气道重塑在支气管哮喘发病中的病理机制 |
| 5.3 细胞自噬在支气管哮喘发病中的病理机制 |
| 5.4 中药对烟熏环境下支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠模型的影响 |
| 5.5 细胞自噬对烟熏哮喘寒饮蕴肺证大鼠气道炎症的影响 |
| 5.6 温阳化饮方对烟熏环境下哮喘寒饮蕴肺证大鼠细胞自噬的影响 |
| 6.结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文 |
（3）B7-H3在儿童支气管哮喘中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 可溶性B7-H3(SB7-H3)在支气管哮喘患儿血浆中的表达及临床意义 |
| 研究对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 B7-H3融合蛋白对小鼠哮喘模型作用的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 TOLL样受体2 信号对B7-H3 作用的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 新型共刺激分子 B7-H3 的研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读硕士期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（4）雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠支气管哮喘的影响及机制研究 |
| 第一节 雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠支气管哮喘及对Th9细胞功能的影响引言 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二节 雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠支气管哮喘的神经机制研究引言 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三节 雾化吸入母牛分枝杆菌治疗小鼠支气管哮喘及对Th9细胞功能的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 雾化吸入母牛分枝杆菌防治小鼠肺呼吸道合胞病毒感染及对Th9细胞功能的影响 |
| 第一节 雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠肺呼吸道合胞病毒感染及对Th9细胞功能的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二节 雾化吸入母牛分枝杆菌治疗小鼠肺呼吸道合胞病毒感染及对Th9细胞功能的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 正常Balb/c小鼠肺功能测定 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述一 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 |
| 参考文献 |
| 附录 (英文缩略词表) |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的学术论文清单 |
| 附件 |
（5）变态反应性鼻炎中医证型与白介素-2受体的相关性研究进展（论文提纲范文）
| 1变态反应性鼻炎的免疫学发病机制 |
| 2IL-2及IL-2R的相关分子生物学特性 |
| 3变态反应性鼻炎与IL-2、IL-2R |
| 4变态反应性鼻炎的病因病机及辨证分型 |
| 5变态反应性鼻炎中医辨证与IL-2R之间的关系 |
（6）芪味理肺汤调控转录因子活化蛋白-1（AP-1）治疗支气管哮喘的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文略缩词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中西医对支气管哮喘治疗的认识与研究现状 |
| 一、古代医家对支气管哮喘的认识 |
| 1.概述 |
| 2.支气管哮喘的病因病机 |
| 3.支气管哮喘的辨证论治 |
| 二、近年中医、西医及中西医结合治疗支气管哮喘的研究现况 |
| 1.概述 |
| 2.中医治疗现状 |
| 3.西医治疗情况 |
| 4.中西医结合治疗 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药治疗支气管哮喘作用机制的研究现状 |
| 一、概述 |
| 二、中医药治疗支气管哮喘作用机制的研究进展 |
| 1.动物模型的制备 |
| 2.中医药治疗支气管哮喘的作用机制 |
| 三、调控AP-1治疗支气管哮喘作用机制的研究概况 |
| 1.概述 |
| 2.AP-1在支气管哮喘发病过程中的地位 |
| 3.调控AP-1环节在治疗支气管哮喘作用机制研究中的应用 |
| 四、中医药调控AP-1治疗支气管哮喘作用机制研究情况 |
| 参考文献 |
| 第二部分 芪味理肺汤治疗法则及方药研究 |
| 一、肺脏的中医生理病理特征 |
| 二、肺系疾病的治疗要点 |
| 三、温润辛金培本是恢复脏腑生理功能的基本法则 |
| 四、芪味理肺汤的处方资料 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 一、实验材料 |
| 1.实验动物 |
| 2.实验药物 |
| 3.主要试剂及仪器 |
| 二、实验方法 |
| 1.动物准备与饲养 |
| 2.动物分组 |
| 3.模型的制备与评价 |
| 4.干预药品的选择与制备 |
| 5.标本处理方法 |
| 6.实验观测方法 |
| 7.结果与数据的分析处理 |
| 三、实验结果 |
| 1.模型判定及疗效指标的观察与检测结果 |
| 2.AP-1实时荧光定量RT-PCR检测AP-1MRNA含量结果 |
| 3.AP-1组成成分含量及活性变化的检测结果 |
| 4 相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的测定结果 |
| 四、讨论 |
| 1.大鼠支气管哮喘模型验证 |
| 2.AP-1是支气管哮喘发病的关键环节 |
| 3.芪味理肺汤治疗支气管哮喘大鼠的疗效 |
| 4.芪味理肺汤治疗支气管哮喘大鼠的作用机制 |
| 五、结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）火针干预对过敏性哮喘豚鼠Th1/Th2失衡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 现代医学对本病的研究 |
| 1. 支气管哮喘的定义及发病特点 |
| 2. 引起支气管哮喘的原因 |
| 3. 支气管哮喘的发病机制 |
| 4. 西医对支气管哮喘的治疗 |
| 第二节 中医学对哮喘的研究 |
| 1. 病名 |
| 2. 病因 |
| 3. 病机 |
| 4. 中医对哮喘的证候认识 |
| 5. 哮病的中医治疗 |
| 第三节 火针治疗支气管哮喘的文献研究 |
| 1. 火针疗法的起源 |
| 2. 火针疗法的作用机理 |
| 3. 火针针具 |
| 4. 火针治疗哮喘的选穴原则 |
| 5. 火针治疗哮喘的作用机制探讨 |
| 第四节 支气管哮喘动物模型的研究现状 |
| 1. 实验动物模型的选择 |
| 2. 哮喘动物模型制备的常用试剂 |
| 3. 各种哮喘动物模型的制备 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 火针疗法对过敏性哮喘豚鼠IL-2、IL-4、IL-10及INF-γ的影响 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第二节 火针干预对过敏性哮喘豚鼠T淋巴细胞亚群分布的影响 |
| 一、材料和分组 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第三节 火针干预对过敏性哮喘豚鼠肺组织病理形态结构的影响 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 详细摘要 |
（8）健脾理肺方对哮喘大鼠的免疫调节作用（论文提纲范文）
| 目录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验试剂及耗材 |
| 3. 实验仪器 |
| 实验一、健脾理肺方对哮喘大鼠血清IGE的影响 |
| 1. 方法 |
| 2. 结果与结论 |
| 3. 讨论 |
| 实验二、健脾理肺方对哮喘大鼠血清IL-4和IFN-г的影响 |
| 1. 方法 |
| 2. 结果与结论 |
| 3. 讨论 |
| 实验三、健脾理肺方对哮喘大鼠血清粘附分子ICAM-1和VCAM-1的影响 |
| 1. 方法 |
| 2. 结果与结论 |
| 3. 讨论 |
| 实验四、健脾理肺方对哮喘大鼠肺组织炎症因子IL-5MRNA的影响 |
| 1. 方法 |
| 2. 结果与结论 |
| 3. 讨论 |
| 实验五、健脾理肺方对哮喘大鼠肺组织GR-B MRNA的影响 |
| 1. 方法 |
| 2. 结果与结论 |
| 3. 讨论 |
| 实验六、健脾理肺方对哮喘大鼠支气管及肺组织病理变化的影响 |
| 1. 方法 |
| 2. 结果与结论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
（9）中医药防治支气管哮喘实验研究进展（论文提纲范文）
| 1 气道炎症方面 |
| 2 气道重塑方面 |
| 3 细胞因子方面 |
| 4 免疫细胞方面 |
| 5 展望 |
（10）畅肺防喘方对哮喘大鼠气道重构和炎症介质的影响的试验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献(一) |
| 实验研究 |
| 第一部分 体内实验 |
| 一、畅肺防喘方对哮喘模型大鼠外周血白细胞、嗜酸性粒细胞及血清IgE的影响 |
| 二、畅肺防喘方对哮喘模型大鼠支气管肺泡灌洗液中Eotaxin、ICAM-1的影响 |
| 三、畅肺防喘方对哮喘模型支气管及肺组织病理变化的影响 |
| 四、体内实验结论分析 |
| 参考文献(二) |
| 第二部分 体外实验 |
| 一、不同浓度的组胺对气管平滑肌细胞增殖的影响 |
| 二、MTT法检测含药血清对His刺激下ASMC增殖活性的影响 |
| 三、畅肺防喘方不同浓度含药血清对ASMC增殖活性的影响 |
| 四、畅肺防喘方不同浓度含药血清对气管平滑肌细胞的增殖细胞核抗原表达的影响 |
| 五、体外实验结论分析 |
| 参考文献(三) |
| 讨论 |
| 参考文献(四) |
| 结语 |
| 附录 |
| 参考文献(五) |
| 致谢 |
| 附图 |
四、喘安对哮喘大鼠可溶性白介素-2受体的影响（论文参考文献）
- [1]肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究[D]. 司东旭. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]基于“天气通于肺”理论的支气管哮喘寒饮蕴肺证大鼠自噬功能及中药干预机制研究[D]. 田福玲. 山东中医药大学, 2019(05)
- [3]B7-H3在儿童支气管哮喘中的作用及机制研究[D]. 顾文婧. 苏州大学, 2016(05)
- [4]雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的影响及机制研究[D]. 姜晓红. 广西医科大学, 2015(08)
- [5]变态反应性鼻炎中医证型与白介素-2受体的相关性研究进展[J]. 孙欢欢,王东方. 吉林中医药, 2015(04)
- [6]芪味理肺汤调控转录因子活化蛋白-1（AP-1）治疗支气管哮喘的机制研究[D]. 李四维. 北京中医药大学, 2014(09)
- [7]火针干预对过敏性哮喘豚鼠Th1/Th2失衡的影响[D]. 陈柏源. 广州中医药大学, 2014(01)
- [8]健脾理肺方对哮喘大鼠的免疫调节作用[D]. 刘金环. 湖北中医药大学, 2012(02)
- [9]中医药防治支气管哮喘实验研究进展[J]. 左琳,张念志. 云南中医中药杂志, 2011(01)
- [10]畅肺防喘方对哮喘大鼠气道重构和炎症介质的影响的试验研究[D]. 向希雄. 湖北中医学院, 2009(10)