化学交感神经切除术对神经病动物疼痛反应和α2-肾上腺素能镇痛的影响

一、THE INFLUENCE OF CHEMICAL SYMPATHECTOMY ON PAIN RESPONSIVITY AND α2-ADRENERGIC ANTINOCICEPTION IN NEUROPATHIC ANIMALS（论文文献综述）

唐鹏^[1]（2017）在《PLGA/TCP支架材料的不同三维空间结构对骨缺损部位神经化影响的研究》文中研究指明骨缺损,作为直接或间接暴力所导致的严重骨组织损伤,一直是骨科学界研究的重点和难点。尤其是近十年间,随着地震伤、交通伤和骨肿瘤病人的日益增加,由此导致的大段骨缺损病人的治疗、预后和并发症等更加成为困扰骨外科医生的难题。因此,摸索出一条有效促进缺损修复的方法已成为骨科学术界不得不面临的问题之一。早期,在治疗骨缺损过程中,往往采用传统的手术和外固定架等方法对骨缺损病人进行治疗。这些治疗方法虽然对小段骨缺损效果较明显,但对大段骨缺损的治疗效果并不理想。随着组织工程学治疗理念的提出和发展,为解决骨缺损尤其是大段骨缺损的修复治疗问题提供了有力的契机。近年来,骨组织工程的研究在动物体内实验中虽取得了一定的成果,但总体仍停留在实验室水平。实验最终在新生骨组织形成的数量和质量上均远未达到预期的效果,临床应用与传统治疗方法相比优势并不明显。因此寻找能够有效提高大段骨缺损修复的方法是目前亟待解决的难题。血管化作为近年来组织工程骨研究中的一个热点问题。国内外学者均取得了喜人的研究成果。支架材料的结构因素对于组织工程骨的血管化影响已经得到了证实。具有良好孔间连通的孔隙结构有利于组织工程骨的血管化。这些成果虽然一定程度上解决了组织工程骨的血管化问题,但在修复效果上仍不理想,主要表现为材料的力学性能较差等问题,距离临床应用还有差距。因此,我们考虑在骨组织工程研究当中是否还有其它关键的问题尚待解决呢?我们进行了大量文献阅读和预实验后发现,在正常的骨组织和髓腔内有大量的神经纤维分布,神经调节在骨的正常代谢及改建中起到了重要的作用。骨折部位在缺乏神经支配的情况下,虽然有骨痂生长,但相对于正常的骨折再生骨痂来说,其质量和生物力学强度均明显不足。因此,我们考虑组织工程骨的神经再支配,即组织工程骨的神经化问题可能是组织工程骨修复过程中的一个关键环节。这一问题也许就是解决和完善组织工程骨修复质量的新靶点。随着材料-生物学的发展,支架材料作为组织工程三要素中最为重要的组成部分,已被证实其特殊的三维空间结构对于组织工程骨的成骨和血管化均有重要影响。有研究发现,支架材料的三维空间结构可以影响局部功能细胞的粘附、增殖和迁移,具有定向结构的支架材料更有助于体内周围神经再生。因此,我们设想支架材料的三维空间结构有可能通过影响神经功能细胞的迁移、增殖进而影响组织工程骨神经化的进程,最终影响骨组织的再生修复。综上所述,本实验采用低温沉积技术制备出具有不同三维空间结构的PLGA/TCP支架材料。在体外复合细胞后,观察具有神经功能的雪旺细胞是否会因三维空间结构的变化影响其增殖、粘附及分化等生物学行为。在体内将支架材料植入动物股骨髁部缺损后,观察缺损部位神经的长入情况和组织修复情况,找到最适合神经化的支架材料结构并探讨其作用机制。具体研究内容如下:第一部分利用低温沉积技术制备不同孔径的PLGA/TCP支架材料方法:采用低温沉积技术制备出具有不同孔径和孔隙率的PLGA/TCP支架材料。应用扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope,SEM）对大孔径和小孔径支架材料的孔径和孔隙率进行观察测量并对支架材料的亲水性和生物力学性能进行检测和比较。最后,通过正常培养基与支架材料浸提液的对比试验,检测材料的细胞毒性。结果:大孔径组的孔径和孔隙率明显大于小孔组。低温沉积结合3D打印制备的PLGA/TCP支架材料的平均吸水率为2.2%±0.1%。细胞毒性检测结果显示,材料浸提液的PH值变化不大;与正常培养基组相比,细胞生存率有所下降。结论:低温沉积技术制备的不同孔径的PLGA/TCP支架材料基本满足实验需要。大孔径和小孔径支架材料达到实验对孔径和孔隙率的要求。材料亲水性较好有利于细胞的粘附。细胞毒性检测材料PH值适宜细胞生长。细胞生存率有所下降,考虑与材料的有机溶剂1,4-二氧六环有关。第二部分体外比较不同孔径结构的PLGA/TCP支架材料对雪旺细胞的影响方法:选择1-3天SD大鼠乳鼠,从其体内截取坐骨和臂丛神经进行雪旺细胞（Schwann Cells,SCs）原代培养并取Ⅱ代细胞进行纯化。通过滴注法,将纯化后的雪旺细胞接种于不同孔径的PLGA/TCP支架上。利用扫描电镜观察细胞在不同孔径PLGA/TCP支架材料上的粘附形态和生长情况;Brd U标记不同孔径PLGA/TCP支架材料上细胞繁殖情况;CCK-8法检测不同孔径PLGA/TCP支架材料上细胞的增殖情况;酶联免疫法（Elisa）和RT-PCR检测法观察不同孔径PLGA/TCP支架材料上SCs分泌的神经生长因子（NGF）、神经胶质细胞源神经生长因子（GDNF）和神经细胞粘附分子（Ncam）的表达差异。结果:扫描电镜结果显示材料表面微孔明显,大孔径组孔径周边生长的细胞增殖、迁移均明显优于小孔径组,但小孔径组上的细胞黏附性更强。激光共聚焦显微镜观察Brd U染色结果显示大孔径组孔径周围的细胞数量明显多于小孔径组。CCK-8结果显示24h两组细胞增殖未见显着差异（P>0.05）。48h后,大孔径组细胞增殖明显优于小孔径组（P<0.0001）。酶联免疫法和RT-PCR检测结果显示,随着时间的增加,大孔径组NGF、GDNF和Ncam的表达均高于小孔径组（p<0.05）。结论:孔径在100-300的支架材料复合SCs后,虽然早期刺激了细胞的增殖、迁移和分化,但最终因为材料本身结构的限制,SCs的细胞生物学行为受到抑制。孔径在400-600的支架材料复合SCs后,早期虽然细胞基数不足,SCs释放的神经营养因子数量较小孔径组少,促细胞的增殖、迁移和分化能力也较弱,但随着细胞数量逐步增加和材料本身的结构优势,促进了SCs各项能力的提升。因此,具有不同三维空间结构的支架材料可以影响SCs的细胞生物学行为,其中,大孔径材料更有利于细胞的增殖、迁移和分化能力的提升。同时,大孔径材料的结构优势也有可能促进了局部的血管化和成骨效能。这就为体内观察比较不同三维空间结构支架材料的神经化能力打下了理论基础。第三部分体内比较不同孔径结构的PLGA/TCP支架材料在修复兔股骨髁部骨缺损过程中的神经化研究方法:将不同孔径PLGA/TCP支架材料植入成年新西兰大白兔股骨外上髁缺损部位,于术后2周、4周、8周和12周分别灌注后取材,然后应用扫描电镜、免疫荧光染色、Bielschowshy染色和血清酶联免疫等方法对样本进行处理和观察,探讨不同三维空间结构的骨组织支架材料对缺损部位神经化和成骨的影响。结果:术后大体观察切口愈合良好且大部分动物均可正常活动。相同时间进行组间比较发现,大孔径组较小孔径组支架材料的降解速度快。组织学结果显示2周至4周时骨膜进入孔径内,其中大孔径组孔径内的骨膜组织多于小孔径组。8周时,小孔径组支架材料内的神经纤维数量明显增加。免疫荧光染色结果显示,术后早期,大孔径组内神经递质及其受体表达明显,而小孔径组支架材料的孔径内只有少量点状分布的神经递质表达。直至4周,小孔经组孔径内才有大量神经递质及其受体的阳性反应。8周至12周时,两组新生骨组织周围除神经肽类物质外,神经营养因子表达逐渐减弱。血清中神经肽类物质检测结果显示,2周至4周,除小孔径组,大孔径组和正常组的P物质和NPY的表达均升高（p<0.05）。4周至8周,大孔径组的NPY表达升高（p<0.05）,小孔径组表达未见显着差异（p>0.05）。8周至12周,大孔径组P物质和NPY的表达明显高于其他组（p<0.05）。大孔径组在12周时的上升水平也较小孔径组明显（p<0.05）。结论:通过体内研究我们发现不同三维空间结构的PLGA/TCP支架材料中,大孔径组支架材料具有良好的降解速度和骨膜诱导特性。与此同时,我们还证明了神经化程度与骨形成的速度是成正比的,神经化程度越高,神经递质释放越明显,成骨速度越快。大孔径组除具有良好的神经诱导性,还有很好的成骨作用。由于小孔径支架材料的降解最终改变了其内部三维空间结构,促使材料内神经组织释放出足够多的神经递质,从而加快了小孔径组内的骨组织修复。不但如此,三维空间结构的变化还直接影响了神经营养因子对于神经肽类物质发挥作用,从而最终影响了成骨。这为下一步能够构建更加具有仿生学意义的组织工程人工骨打下了良好的基础。

杜利^[2]（2016）在《胍丁胺对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用及机制》文中研究表明多发性硬化（multiple sclerosis,MS）是中枢神经系统一种自身免疫性疾病,以炎症,脱髓鞘,轴索缺失,神经胶质细胞过度增生为特征。MS仍无法治愈,目前治疗主要在于减轻疾病的复发和延缓疾病的进展。实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）是MS的经典动物模型。胍丁胺（Agmatine,Agm）是一种内生性胺。EAE发病过程中骨形成蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）的表达升高。研究表明Agm可通过调节BMP2/4/7的表达可以改善脊髓损伤后的神经功能。Agm对MS/EAE将会是一种潜在的治疗方法,应用Agm治疗MS/EAE的研究目前较少。研究目的:观察Agm对谷氨酸诱导损伤性神经元的保护作用;用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白和完全弗式佐剂混合乳液皮下注射C57BL/6小鼠建立EAE动物模型;用Agm腹腔注射EAE小鼠,观察EAE症状的变化,并阐述其可能治疗机理。研究方法:（1）建立谷氨酸损伤模型及星型胶质细胞与神经元共培养体系。（2）Agm刺激星型胶质细胞和神经元,ELISA检测BMP的表达。（3）Agm刺激谷氨酸诱导的共培养的星型胶质细胞与神经元。（4）用MOG35-55加完全弗氏佐剂（CFA）混合乳液皮下注射C57BL/6小鼠,腹腔注射百日咳毒素（pertussis toxin,PTX）建立EAE模型。（5）EAE动物,分不同时间,不同剂量腹腔注射Agm,对照组PBS腹腔注射,观察各组的治疗效果。（6）发病高峰期（第20天）分离治疗有效组,对照组和正常组小鼠脊髓,通过免疫荧光,Western blotting和PCR检测各组BMP2、BMP4、BMP7,p Smad1/5/8,GFAP,Olig2,MAP2,CD11b/c,NF-κBp65,p-IκB-α,IκB-α的表达量。研究结果:（1）Agm对神经元的保护作用与剂量有关。（2）Agm刺激星型胶质细胞和神经元后BMP7表达明显上升（P 0.01）。（3）MOG抗原和CFA乳液皮下注射,PTX腹腔注射能够有效诱导EAE模型。（4）与PBS组相比,Agm治疗组脊髓内BMP2/4/7,NF-κBp65,p-IκB-α的表达降低（P 0.01）。（5）与PBS组相比,Agm治疗组脊髓内IκB-α的表达增高（P 0.01）。（6）与PBS组相比,Agm治疗组脊髓内小胶质细胞和的数量明显减少了（P 0.01）,神经元和少突胶质细胞的数量明显增加了（P 0.01）。（7）所有实验均重复3次以上,所得数据用均数±标准差表示,两组之间的计量资料的均数比较用t检验,三组之间的均数比较用单因素方差分析,用所有实验均重复3次以上,所得数据用均数±标准差表示,两组之间的计量资料的均数比较用t检验,三组之间的均数比较用单因素方差分析,用重复测量数据的方差分析比较各EAE治疗组之间的差异是否具有统计学意义,P 0.05时差差异具有统计学意义。研究结论:（1）Agm可通过调节BMP7的表达保护谷氨酸引起的神经元损伤。（2）C57BL/6小鼠应用MOG35-55加CFA可成功诱导EAE模型。（3）Agm能有效减轻EAE症状。（4）Agm可通过调节BMP2、7的表达减轻EAE症状。（5）Agm能有效减轻EAE小鼠脊髓内小胶质细胞的表达,增加少突胶质细胞和神经元的表达。

王艳洁,宋立军,舒强,丁峰,李兴福,刘花香^[3]（2012）在《去甲肾上腺素对培养的背根神经节神经元P物质释放的调节作用》文中研究指明在组织损伤或炎症状态下,去甲肾上腺素能神经的可塑性变化会影响其对抗伤害性刺激的效能。在生理和病理条件下,去甲肾上腺素（noradrenaline,NA）是激活肾上腺素能受体的关键神经递质。有趣的是,α1-肾上腺素能受体和α2-肾上腺素能受体在背根神经节（DRG）初级传入神经元都有表达并且调节神经源性炎症和伤害性刺激反应。NA的释放可参与调节

王艳洁^[4]（2012）在《去甲肾上腺素对培养的背根神经节神经元P物质释放的调节作用》文中进行了进一步梳理在组织损伤或炎症状态下,去甲肾上腺素能神经的可塑性变化会影响其对抗伤害性刺激的效能。在生理和病理条件下,去甲肾上腺素（noradrenaline, NA）是激活肾上腺素能受体的关键神经递质。有趣的是,α1-肾上腺素能受体和α2-肾上腺素能受体在背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）初级传入神经元都有表达并且调节神经源性炎症和伤害性刺激反应。在体外培养的大鼠DRG神经元中,NA可以通过激活α1-肾上腺素能受体而非α2-肾上腺素能受体来抑制热激活的K+通道电流。NA的释放可参与调节伤害感受性刺激。P物质（substance P,SP）是一个含11个氨基酸的神经肽,存在于支配周围组织的感觉神经内,可参与炎症反应和伤害感受性刺激的调节。对伤害感受性刺激作出反应的DRG初级传入神经元具有表达SP的特征。SP的释放可激活上行感觉神经元将痛觉信号从周围神经系统（peripheral nervous system, PNS）传递到中枢神经系统（central nervous system, CNS）。SP从周围神经末梢的释放会引起神经源性炎症。很多因素或物质会引起SP释放而导致神经源性炎症。有实验证实α1-肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素会引起辣椒素（capsaicin, CAP）敏感感觉神经末梢释放P物质。由注射CAP引起的神经源性炎症和疼痛取决于对交感传出神经释放NA的反应。激活或抑制α-肾上腺素能受体是否会影响DRG神经元SP的表达和释放目前仍不清楚。本研究建立胎鼠DRG神经元分散培养的模型,用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）分析技术、蛋白质印迹法（Western blot assay）、免疫荧光双标技术和酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELIS A）,研究α-肾上腺素能受体激动剂NA和α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌哗嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对体外培养的DRG神经元SP的表达和释放的影响作用。本课题的研究结果如下：（1）RT-PCR分析结果显示,培养液中加入α-肾上腺素能受体激动剂NA、α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌哗嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对DRG神经元编码SP的前速激肽原（preprotachykinin, PPT） mRNA的表达水平没有显着影响。（2）蛋白质印迹法分析结果显示,α-肾上腺素能受体激动剂NA、α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对DRG神经元SP的表达水平没有显着影响。（3）免疫荧光双标技术研究结果显示,α-肾上腺素能受体激动剂NA、α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌哗嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对表达SP的神经元比率没有显着影响。（4）ELISA分析结果显示,α-肾上腺素能受体激动剂NA、α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对SP的基础释放量没有显着影响；而NA可增加CAP诱发的SP释放量,哌哗嗪预处理能够减少由NA导致的CAP诱发的SP释放量的增加,育亨宾对NA诱导增加的CAP诱发的SP释放无明显作用。以上结果表明,NA对DRG神经元SP蛋白水平和mRNA水平的表达均无明显影响作用；NA对DRG神经元SP的基础释放量没有显着影响；NA能够促进CAP诱发的SP释放,而这一作用是通过激活α1-肾上腺素能受体而发挥作用的,这可能是NA与疼痛调节作用有关的机制之一。这一研究结果为进一步研究NA在神经源性炎症状态下对痛觉信号传导的调节作用及其机制提供了一定的实验依据。

Chin Hee Mun,Won Taek Lee,Kyung Ah Park,Jong Eun Lee^[5]（2010）在《Agmatine reduces nitric oxide synthase expression and peroxynitrite formation in the cerebral cortex in a rat model of transient global cerebral ischemia》文中研究指明Agmatine, an analog of L-arginine, is an endogenous substance synthesized by arginine decarboxylase, which has been shown to possess neuroprotective effects following brain ischemia. Nitric oxide is generated by sequential oxidation of the guanidinium group in L-arginine, and agmatine might protect the brain from ischemic injury by interfering with nitric oxide signaling. This study investigated the effects of agmatine on cerebral cortex neuronal injury following transient global cerebral ischemia and also detected nitric oxide synthase expression and peroxynitrite formation. Results demonstrated that intraperitoneal injection of agmatine in global cerebral ischemia/reperfusion alleviated ischemia/reperfusion-induced cerebral cortical cortex neuronal injury and cellular apoptosis, decreased neuronal and inducible nitric oxide synthase expression at 24, 48, and 72 hours following global cerebral ischemia and reperfusion, and greatly inhibited nitrotyrosine levels, which reflect the amount of peroxynitrite formed. These findings indicated that agmatine alleviates cerebral cortex neuronal injury following global cerebral ischemia and decreases nitric oxide synthase expression and peroxynitrite formation following ischemia/reperfusion.

刘真^[6]（2008）在《促生长激素神经肽在感觉和交感神经节的表达及有关的痛觉调节机制》文中认为促生长激素神经肽（galanin,Gal）是一个由29/30个氨基酸（在大多数物种为29个氨基酸,在人为30个氨基酸）组成的神经肽,在神经系统有广泛的表达,可发挥调节伤害性刺激、神经元发育和神经营养等多种生物学功能。在周围感觉神经节神经元和交感神经节（sympathetic ganglion,SG）神经元都检测到Gal的表达。Gal在周围神经系统对损伤的适应性反应及调节痛觉传递的过程中可能发挥作用。Gal被认为是背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）神经元损伤的标志物之一和交感神经元轴突受到严重损伤时神经元表型改变的一个标志。在正常成年动物,Gal在感觉神经元和SG神经元表达的水平很低;在周围神经损伤和炎症状态下,Gal的表达显着上调。外周去甲肾上腺素能系统与痛觉的调节有一定的关系。正常健康状态下,去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）对痛觉的影响作用极小,在神经损伤或炎症时,去甲肾上腺素能系统发生的各种可塑性变化可影响其对抗伤害性刺激的效能。不同的α-受体的亚型在交感神经元有表达,这些受体激活后可影响交感神经系统的活性或神经递质的表达或释放,并最终导致不同的效应。有趣的是,在初级感觉神经元也有功能性的α-受体表达,α-受体在介导NE对疼痛调节作用的过程中起着关键的作用,并调节神经源性炎症和伤害性刺激的反应。但激活α-受体对Gal表达的影响作用尚有待于证实。神经生长因子（nerve growth factor,NGF）不仅是一种重要的神经营养因子,而且还是炎症和疼痛的重要调节因子。NGF不仅影响DRG感觉神经元内包括Gal在内的多种神经肽的表达,也可调节SG神经元内神经肽的表达。外源性NGF对DRG神经元和SG神经元Gal表达的影响作用目前尚不清楚。6-羟多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）和辣椒素（capsaicin,CAP）分别可以毁损SG交感神经元和DRG感觉神经元。6-OHDA是高效的儿茶酚胺选择性的神经毒素,对SG神经元Gal的表达变化有类似于轴突切断所致的效应。然而,6-OHDA对SG神经元Gal表达的影响程度目前尚不清楚。CAP通过激活位于初级传入神经元的辣椒素受体（vanilloid receptor 1,VR1）而发挥作用,大剂量CAP可选择性毁损初级传入神经元。Gal的受体GalR2和VR1在DRG神经元共同表达。CAP是否可影响DRG神经元Gal及其受体GalR2的表达需要进一步探讨。感觉神经肽和VR1的表达反映了DRG神经元感受伤害性刺激的特性。在初级传入神经元表达的感觉神经肽P物质（substance P,SP）在介导伤害性刺激的过程中发挥作用,Gal和SP可在同一个DRG感觉神经元中共存。外源性的Gal是否能影响DRG神经元VR1以及SP的表达尚需要进一步证实。在正常情况下,Gal在感受伤害性刺激的过程中只发挥较小的作用,然而在神经病理状态下,Gal对伤害性刺激的调节可发挥重要的作用。在非炎性刺激和炎症刺激条件下,Gal是一个重要的疼痛或痛觉过敏的调节因子。然而,Gal产生这种兴奋性作用的机制并不清楚。大鼠足底注射福尔马林可诱发自发性疼痛行为反应,Gal对此是否具有影响作用及其作用机制目前尚不清楚。根据以上研究背景可知Gal与多种生理及病理生理机制相关。但是NE、CAP、NGF对DRG神经元Gal的表达的影响作用,NGF、6-OHDA、α-受体激动剂对SG神经元Gal表达的影响作用以及Gal在福尔马林诱发的炎性疼痛中的作用机制尚不清楚。因此,本研究建立了DRG神经元和颈上神经节（superiorcervical ganglion,SCG）神经元培养模型,用这两个培养模型,分别研究了NE、CAP、NGF对DRG神经元Gal的表达的影响作用,NGF、6-OHDA、α-受体激动剂对SCG神经元Gal表达的影响作用。用动物实验探讨了Gal在福尔马林诱发的伤害性刺激中的作用及其机制。此外,NGF所致的DRG和SCG神经元轴突再生与Gal表达的关系,CAP对DRG神经元GalR2表达的影响,外源性Gal对DRG神经元SP释放、VR1表达的影响作用在本实验中也进行了探讨。DRG取自胚胎15 d的Wistar大鼠,SCG神经元取自新生Wistar大鼠。DRG神经元和SCG神经元培养24 h后,再用阿糖胞苷（cytarabine,ara-C）作用24h抑制非神经元细胞生长。之后,用不同的处理因素作用4 d或正常培养4 d后用不同的处理因素作用4 h后进行检测。（1）NE及α-受体拮抗剂孵育DRG神经元:DRG神经元用NE(10-4mol/L)孵育4 d,或在加入NE之前10 min,在培养液内预先加入α1-受体拮抗剂哌唑嗪(10-6mol/L)或α2-受体拮抗剂育亨宾(10-5mol/L)。检测对Gal及其mRNA的表达。（2）NGF孵育DRG神经元:DRG神经元用NGF（10 ng/ml）或NGF（10ng/ml）加NE(10-4mol/L)孵育4 d,检测Gal及其mRNA的表达及单个神经元的轴突总长度。（3）CAP孵育DRG神经元:①DRG神经元用不同浓度的CAP(10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L)孵育4 h,检测Gal和GalR2及其mRNA的表达;②DRG神经元用不同浓度的CAP(10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L)孵育4 d,检测Gal和GalR2及其mRNA的表达。（4）外源性Gal孵育DRG神经元:DRG神经元用不同浓度的Gal(10-9mol/L,10-8mol/L,10-7mol/L)孵育4 d,检测VR1及其mRNA、SPmRNA的表达及SP的释放。在加入Gal之前10 min,预先加入GalR拮抗剂M35(10-8mol/L)或PKC抑制剂Calphostin C(10-7mol/L),检测GalR拮抗剂及PKC抑制剂对Gal作用的影响。（5）选择性α-受体激动剂孵育SCG神经元:SCG神经元分别用α1-受体激动剂苯肾上腺素(10-5mol/L)和α2-受体激动剂可乐定(10-5mol/L)孵育4 d,检测Gal及其mRNA的表达。（6）NGF或/和6-OHDA孵育SCG神经元:SCG神经元用NGF（10 ng/ml）、6-OHDA(10-5mol/L)、NGF（10 ng/ml）加6-OHDA(10-5mol/L)孵育4 d,检测Gal及其mRNA的表达及单个神经元的轴突总长度。动物实验所用动物为体重为220～250g的雄性Wistar大鼠。随机分为5组,每组10只动物。Gal组、福尔马林组、福尔马林+Gal组、福尔马林+Gal+GalR拮抗剂组、福尔马林+Gal+PKC抑制剂组。在大鼠左侧后足底注射20μl 2%的福尔马林诱发炎症,同时注射20μl Gal（0.1 ng/μl）,之后进行缩足反射行为学检测实验。GalR拮抗剂（M35）在注射Gal前20 min、PKC抑制剂（CalphostinC）在注射Gal前60 min注射。Gal组、福尔马林组分别只注射20μl Gal（0.1ng/μl）或20μl 2%的福尔马林。行为学检测后,取左侧腰骶部DRG和腰骶部SG,检测Gal及其mRNA的表达。本研究的结果显示:（1）用NE(10-4mol/L)卵育4 d后,培养的DRG神经元中Gal及其mRNA的表达增加;用α1-受体阻断剂哌唑嗪(10-6mol/L)预处理可阻断NE的这一效应;用α2-受体阻断剂育亨宾(10-5mol/L)预处理则不影响NE引起的Gal及其mRNA的表达增加。（2）用NGF（10 ng/ml）孵育4 d后,培养的DRG神经元中Gal及其mRNA的表达降低;NGF还可抑制NE诱发的Gal及其mRNA表达。NGF能促进DRG神经元轴突再生,而NE则不能促进DRG神经元轴突再生。（3）CAP(10-6mol/L)急性处理（4 h）或CAP(10-8mol/L,10-7mol/L)长期孵育（4d）均可促进Gal及其mRNA的表达,CAP(10-7mol/L)长期孵育（4 d）可促进GalR2及其mRNA的表达。（4）外源性Gal可增加DRG神经元CAP诱发的SP释放量,但不影响SP及其mRNA的表达以及基础SP释放量。外源性Gal可促进DRG神经元VR1及其mRNA的表达,并呈剂量依赖方式。外源性Gal所致的DRG神经元VR1表达增加可部分地被GalR拮抗剂M35或PKC抑制剂Calphostin C所抑制。（5）α2-受体激动剂可乐定(10-5mol/L)可抑制SCG神经元Gal及其mRNA的表达,α1-受体激动剂苯肾上腺素(10-5mol/L)对SCG神经元Gal及其mRNA的表达无影响。（6）NGF（10 ng/ml）可抑制SCG神经元Gal及其mRNA的表达;6-OHDA(10-5mol/L)孵育SCG神经元,可促进Gal及其mRNA的表达;联合应用NGF和6-OHDA,NGF不能抑制6-OHDA引起的Gal及其mRNA表达的上调,但NGF能促进SCG神经元轴突再生。（7）注射福尔马林可诱发大鼠自发性疼痛行为缩足反射,注射20μl Gal（0.1 ng/μl）可增加缩足反射的次数。在注射Gal前注射30μl（20 ng/μl）Gal受体拮抗剂M35或30μl PKC抑制剂Calphostin C（0.1ng/μl）,可部分抑制Gal引起的疼痛增强效应。（8）大鼠足底内注射福尔马林可引起同侧腰骶部DRG内Gal mRNA表达增加,神经肽Gal的表达无变化。腰骶部SG内Gal及其mRNA表达均无变化。这些结果表明:（1）DRG神经元内Gal的表达可受NE、NGF、CAP等多种因素的影响。NE通过作用于α1-受体,而不是α2-受体,增强了DRG神经元Gal的表达,这可能是外周促进伤害性刺激的肾上腺素能调节机制之一。NGF抑制DRG神经元内Gal的表达,一定孵育时间和孵育浓度的CAP刺激DRG神经元,Gal及其受体GalR2表达上调。这反映了Gal所介导的伤害性刺激作用机制的复杂性。（2）SCG神经元内Gal的表达可受α2-受体激动剂、NGF、6-OHDA等多种因素的影响。交感神经元α2-受体的激活对Gal的表达有抑制作用,表明α2-受体可能参与了Gal介导的损伤刺激或炎症反应。外源性NGF可使培养的SCG神经元Gal表达下调,而6-OHDA则可使Gal表达上调。（3）Gal可能介入了与VR1有关的伤害性刺激调节机制,GalR的活化和PKC通路被激活可能是其作用机制。Gal对福尔马林诱发的炎性疼痛的增强作用可能是由于Gal作用于GalR后激活了PKC细胞信号转导通路所致。选择性GalR拮抗剂和PKC抑制剂可能对炎性疼痛的治疗具有一定的应用价值。

Antti PERTOVAARA^[7]（2001）在《THE INFLUENCE OF CHEMICAL SYMPATHECTOMY ON PAIN RESPONSIVITY AND α2-ADRENERGIC ANTINOCICEPTION IN NEUROPATHIC ANIMALS》文中提出 Aim: We studied the effect of chemical sympathectomy by 6-hydroxydopamine （6OHDA） on pain behavior and α2-adrenergic antinociception in rats with a spinal nerve ligation-induced neuropathy or a sham-operation. Methods: For assessment of tactile allodynia, the hindlimb withdrawal threshold was determined by monofilaments. Paw pressure test was used for assessment of mechanical nociception and hyperaigesia.

二、THE INFLUENCE OF CHEMICAL SYMPATHECTOMY ON PAIN RESPONSIVITY AND α2-ADRENERGIC ANTINOCICEPTION IN NEUROPATHIC ANIMALS（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、THE INFLUENCE OF CHEMICAL SYMPATHECTOMY ON PAIN RESPONSIVITY AND α2-ADRENERGIC ANTINOCICEPTION IN NEUROPATHIC ANIMALS（论文提纲范文）

（1）PLGA/TCP支架材料的不同三维空间结构对骨缺损部位神经化影响的研究（论文提纲范文）

（2）胍丁胺对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用及机制（论文提纲范文）

（4）去甲肾上腺素对培养的背根神经节神经元P物质释放的调节作用（论文提纲范文）

（6）促生长激素神经肽在感觉和交感神经节的表达及有关的痛觉调节机制（论文提纲范文）

四、THE INFLUENCE OF CHEMICAL SYMPATHECTOMY ON PAIN RESPONSIVITY AND α2-ADRENERGIC ANTINOCICEPTION IN NEUROPATHIC ANIMALS（论文参考文献）

• [1]PLGA/TCP支架材料的不同三维空间结构对骨缺损部位神经化影响的研究[D]. 唐鹏. 第四军医大学, 2017(02)
• [2]胍丁胺对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用及机制[D]. 杜利. 吉林大学, 2016(08)
• [3]去甲肾上腺素对培养的背根神经节神经元P物质释放的调节作用[A]. 王艳洁,宋立军,舒强,丁峰,李兴福,刘花香. 山东省第九次风湿病学学术会议暨风湿免疫疾病生物治疗进展学习班论文汇编, 2012
• [4]去甲肾上腺素对培养的背根神经节神经元P物质释放的调节作用[D]. 王艳洁. 山东大学, 2012(02)
• [5]Agmatine reduces nitric oxide synthase expression and peroxynitrite formation in the cerebral cortex in a rat model of transient global cerebral ischemia[J]. Chin Hee Mun,Won Taek Lee,Kyung Ah Park,Jong Eun Lee. Neural Regeneration Research, 2010(23)
• [6]促生长激素神经肽在感觉和交感神经节的表达及有关的痛觉调节机制[D]. 刘真. 山东大学, 2008(01)
• [7]THE INFLUENCE OF CHEMICAL SYMPATHECTOMY ON PAIN RESPONSIVITY AND α2-ADRENERGIC ANTINOCICEPTION IN NEUROPATHIC ANIMALS[J]. Antti PERTOVAARA. 神经解剖学杂志, 2001(S1)

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