CD44v6和survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

一、CD44v6和survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义（论文文献综述）

贾丽伟,郑超,王大巍,杨晶晶,刘敬禹,吴月明,王大巍^[1]（2017）在《结肠黏液腺癌黏膜组织CD44v6和Survivin的表达及临床意义》文中研究指明目的检测结肠黏液腺癌和正常结肠黏膜组织中CD44v6和Survivin的表达,分析二者的表达差别及相关性。方法 43例结肠黏液腺癌术后留取的新鲜组织为观察组,非肿瘤性结肠黏膜新鲜组织23例为对照组,均制备单细胞悬液后应用流式细胞术检测两组CD44v6和Survivin表达。结果两组CD44v6和Survivin表达量差异有统计学意义（P<0.05）,观察组CD44v6和Survivin表达量与肿瘤最大径、淋巴结转移和增殖指数均密切相关,CD44v6的表达与肿瘤是否浸出肌层相关。线性相关分析显示观察组中CD44v6和Survivin呈正相关。结论结肠黏液腺癌中CD44v6和Survivin的表达异常,不仅可以促进病变形成,还对病变进展有重要作用。二者可能具有正向协同作用。

刘中阳^[2]（2013）在《β-catenin、APC在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义》文中指出目的探讨β-catenin、APC在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法收集2006年1月至2007年12月在郑州大学第一附属医院泌尿外科确诊为膀胱移行细胞癌患者的临床资料和石蜡组织标本87例,采用免疫组织化学法分析β-catenin、APC在膀胱移行细胞癌组织标本中的蛋白表达状况。以15例正常膀胱组织的石蜡标本作对照。结果APC在BTCC组织和正常膀胱组织中的正常表达率分别为43.7%（38/87）和93.3%（14/15）,差异有统计学意义（x2=12.623, P=0.001）。APC蛋白的正常表达率与临床分级、分期明显相关,随着肿瘤分级和肿瘤分期的提高,APC蛋白的正常表达率不断降低,差异都具有统计学的意义（P<0.05）。而APC蛋白的正常表达率在不同性别、不同年龄、肿瘤的大小、肿瘤单发和多发、淋巴结转移与否、既往复发频率、首次复发时间、生长方式以及肿瘤位置之间的比较并未发现显着性差异（P>0.05）。在复发组与未复发组的比较中,APC蛋白的正常表达率分别为37.8%（14/37）和48.0%（24/50）,差异无统计学意义（x2=0.893,P=0.234）。Kaplan-Meier分析显示,APC蛋白异常表达组患者的平均生存时间为52.4±1.5个月,中位生存时间50.0个月；正常表达组为66.2±1.9个月,中位生存时间68.4个月。log-rank生存曲线检验,差异有统计学意义（x2=19.29,P=0.000）。β-catenin在BTCC组织和正常膀胱组织中的正常表达率分别为57.4%（50/87）和100%（15/15）,差异有统计学意义（x2=10.011,P=0.001）。β-catenin蛋白的正常表达率与临床分级、分期及既往复发频率明显相关,随着肿瘤的分级和肿瘤的分期以及肿瘤的既往复发频率增加,β-catenin蛋白的正常表达率不断降低,差异都具有统计学意义（P<0.05）。而β-catenin蛋白的正常表达率在不同性别、不同年龄、肿瘤的大小、肿瘤单发和多发、淋巴结转移与否、首次复发时间、生长方式以及肿瘤位置之间的比较并未发现显着性差异（P>0.05）。在复发组与未复发组的比较中,β-catenin蛋白的正常表达率分别为37.8%（14/37）和72.0%（36/50）,差异有统计学意义（x2=10.153,P=0.001）。Kaplan-Meier分析显示,β-catenin蛋白异常表达组患者的平均生存时间为48.7±1.5个月,中位生存时间46.5个月；β-catenin蛋白正常表达组为67.5±4.0个月,中位生存时间67.3个月,经log-rank生存曲线检验,差异有统计学意义（x2=21.18,P=0.000）。在BTCC组织中,APC蛋白的正常表达与β-catenin蛋白的正常表达显着相关（r=0.277,P=0.006）。结论APC蛋白的正常表达率在膀胱移行细胞癌组织中明显降低且与临床分级、分期相关,β-catenin蛋白的正常表达率在膀胱移行细胞癌组织中明显降低且与临床分级、分期及既往复发频率明显相关,两者蛋白的正常表达具有显着相关性,β-catenin蛋白正常表达的患者术后可能有较低的复发率,而β-catenin、APC蛋白正常表达的患者具有显着的生存优势。在BTCC的发生、发展中,β-catenin、APC可能具有重要作用,有望成为判断膀胱癌生物学行为和预后以及靶向治疗的新指标。

陈小慧^[3]（2013）在《p53、p21、VEGF和CXCR4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义》文中认为目的：研究p53、p21、Ki-67、VEGF、CXCR4在膀胱尿路上皮癌（Bladder UrothelialCarcinoma，BUC）中表达，探讨它们与BUC病理分级、临床分期及预后的关系，为膀胱尿路上皮癌的临床病理诊断、治疗及预后评估提供理论依据。方法：回顾性研究2008年1月2010年12月连云港地区105例术后病理检查为膀胱尿路上皮癌患者标本蜡块，将其作为BUC组。入选的病例中，男74例，女31例，年龄4472岁，平均年龄56.3岁。膀胱癌病理分级（WHO/ISUP,2004）：非浸润性尿路上皮癌64例，浸润性尿路上皮癌41例；临床分期按国际抗癌联盟UICC—TNM标准分为：浅表性癌（TaT1）62例，浸润性癌（T2T4b）43例。并选择同期的20例正常膀胱组织作为对照。20例正常膀胱粘膜取自耻骨上经膀胱前列腺摘除手术的标本。运用免疫组化SP法检测105例BUC病理标本和20例正常膀胱组织中p53、p21、Ki-67、VEGF、CXCR4的表达；另将105例患者中初发的69例与复发的36例BUC标本中p53、p21、Ki-67、VEGF、CXCR4的表达进行统计。将上述免疫组化结果与BUC病理分级、临床分期以及预后情况进行比较分析。应用SPSS17.0统计软件处理数据结果并进行卡方检验，相关性比较采用Spearman等级相关分析（Spearmancorrelation coefficients test），P<0.05表示差异有统计学意义。结果：1．p53、p21、Ki-67、VEGF、CXCR4在正常膀胱粘膜中的阳性表达率极低，在膀胱尿路上皮癌中的阳性表达率明显高于正常膀胱粘膜（P<0.01）。2．从病理分级的角度p53、VEGF在浸润性尿路上皮癌中的表达明显高于其在非浸润性尿路上皮癌中的表达，差异具有统计学意义（P<0.01）；p21、Ki-67、CXCR4在浸润性尿路上皮癌中的表达与其在非浸润性尿路上皮癌中的表达并无明显差异（P＞0.05）。3．从临床分期的角度p53、p21、Ki-67、VEGF、CXCR4在浸润性癌中的阳性表达率明显高于其在浅表性癌中的阳性表达率，差异具有统计学意义（P<0.05）。4．复发病例中p53、p21、Ki-67、VEGF、CXCR4的阳性表达率明显高于其在初发病例中的阳性表达率，差异具有统计学意义（P<0.05）。5.采用Spearman等级相关性分析对五个标记物两两比较，p53与p21、p53与Ki-67、p53与VEGF、Ki-67与VEGF以及VEGF与CXCR4均呈显着正相关（P<0.05）。其余组间无明显相关性（P﹥0.05）。结论：细胞周期相关蛋白p53、p21、增殖相关核抗原Ki-67及促血管生成因子VEGF、CXCR4与膀胱尿路上皮癌的病理分级、临床分期及预后有一定的相关性。p53、p21、Ki-67、VEGF、CXCR4通过影响细胞周期及血管生成的相关机制，促进了膀胱尿路上皮癌的发生，进而影响其进展与预后。p53、p21、Ki-67、VEGF、CXCR4的表达对膀胱尿路上皮癌的临床病理诊断、治疗及预后评估具有一定的指导意义。

李倩^[4]（2012）在《CD44v6在人膀胱癌组织的表达及其对膀胱癌细胞生物学行为的影响》文中研究说明目的：在我国,膀胱癌发病率居泌尿系统肿瘤首位,具有易复发、易侵袭、易产生获得性耐药等特点,其治疗效果并不理想。新的膀胱癌药物的研发成为膀胱癌治疗领域更待解决的问题。我们的前期研究发现,膀胱癌干（起始）细胞就存在于EMA-CD44v6+亚群,且这群以CD44v6蛋白为标记物的癌细胞很可能是膀胱癌复发和转移的主要原因。人类多种恶性肿瘤组织中普遍存在CD44v6表达失控,其高表达被认为与肿瘤的发生、发展及转移有关。鉴于此,本课题检测了细胞黏附分子CD44v6和上皮膜抗原EMA在膀胱尿路上皮细胞两类癌中的表达情况,利用特异性封闭型抗CD44v6单克隆抗体封闭,探讨其对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响,并对可能的分子机制进行初步探讨。方法：1、本研究收集40例外科手术切除膀胱癌标本和5例正常膀胱组织,应用免疫组织化学（PowerVision两步法）检测不同病理分期及组织分级的BTCC标本和正常膀胱粘膜中,EMA和CD44v6蛋白的表达,系统分析它们与临床病理参数之间的关系,研究二者在膀胱癌不同病理分期及组织分级的表达情况。2、体外培养膀胱癌细胞T24和正常膀胱粘膜上皮,采用免疫细胞化学法检测膀胱癌细胞T24和正常膀胱尿路上皮细胞中,CD44v6蛋白的表达情况。3、通过抗体封闭的手段,用不同浓度的anti-CD44v6单抗分别与人膀胱癌细胞T24共同培‘养24h、48h、72h后,MTT法观察细胞生长情况,流式细胞仪FCM检测细胞凋亡情况。免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bax和bcl-2的胞内表达情况。4、Transwell侵袭迁移实验观察anti-CD44v6单抗作用后,膀胱癌细胞T24侵袭迁移能力的变化。结果：1、EMA和CD44v6在膀胱癌中的阳性表达率分别为92.5%和57.5%。EMA的表达率与膀胱肿瘤组织学分级和分期无关（P>0.05）。随着膀胱癌进展,CD44v6表达显着下降,与病理分级及分期有关（P<0.01）。正常和癌性尿路上皮中EMA-细胞位于可能的干细胞位置（基底细胞层）,EMA+细胞总是位于相对成熟的位置（靠近上皮腔面）。正常和癌性尿路上皮中CD44v6+细胞位于可能的干细胞位置（基底细胞层）,CD44v6-细胞总是位于相对成熟的位置（靠近表层）。2、膀胱癌细胞株T24中,CD44v6蛋白均一表达,主要表达在细胞膜,呈均匀棕黄色染色,细胞浆内有染色少许或无色,而正常膀胱尿路上皮细胞几乎不表达CD44v6蛋白。3、MTT法检测结果显示,通过anti-CD44v6单抗封闭,可抑制T24细胞的生长（P<0.05）,诱导T24细胞凋亡（P<0.01）,并且bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加（P<0.01）。光镜下可见经抗体封闭的细胞形态学的改变。4、与anti-CD44v6单抗封闭前相比,经anti-CD44v6单抗封闭处理之后,可见穿膜细胞数目明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1、依据免疫组化结果,表明CD44v6+和EMA-可能是膀胱癌干（起始）细胞表面标志。2、膀胱癌细胞T24经anti-CD44v6单抗封闭后,细胞的增殖受到抑制,呈时间剂量依赖关系。经anti-CD44v6单抗封闭后,凋亡率增加,推测其机制可能与凋亡调控基因bcl-2和Bax表达水平变化有关。3、CD44v6蛋白与肿瘤细胞的侵袭迁移运动密切相关, anti-CD44v6单抗封闭可以抑制T24细胞侵袭迁移能力。

刘光明^[5]（2005）在《PTEN、FAK、MMP-2和CD44v6在膀胱移行细胞癌中的表达及意义》文中指出膀胱移行细胞癌是泌尿外科的常见肿瘤,其生物学行为的多样性和复杂性使疾病的预后判断成为临床治疗膀胱癌的难点之一。 近来,一个新的抑癌基因PTEN被发现与多种肿瘤有关,它具有蛋白磷酸酶活性和脂质磷酸酶活性,能通过多种途径调节肿瘤的生长、侵袭、转移、凋亡。粘着斑激酶（FAK）作为一种胞内酪氨酸激酶,是整合素细胞介导的信号途径中的一个关键分子。CD44v6是一种黏附分子,主要在上皮源性细胞和肿瘤细胞中表达,具有组织特特异性,与肿瘤的侵润转移相关。文献报道:PTEN的蛋白磷酸酶活性能够通过FAK去磷酸化来抑制FAK介导的细胞侵润转移,而磷酸化的FAK能介导CD44v6的信号传导,激活下游信号P13k和丝裂原活化蛋白激酶,发挥抗凋亡作用。基质金属蛋白酶（MMP-2）在膀胱癌中的研究较早,它通过对基质主要成分胶原的溶解促进肿瘤的侵润和转移,近来研究PTEN在肿瘤中的表达及影响时发现PTEN能够在mRNA水平下调MMP-2的转录并影响其酶的活性。本试验采用免疫组织化学（PowerVision两步法）的方法,检测PTEN、FAK、CD44v6和MMP-2在正常膀胱粘膜和膀胱移行细胞癌中的表达情况和相互关系,初步探讨这几种因子对膀胱移行细胞癌发展、侵润和转移过程的影响及其预后价值。 本研究随机选取42例膀胱移行细胞癌标本和8例正常膀胱粘膜标本,采用免疫组织化学（PowerVision 两步法）的方法检测PTEN、FAK、CD44v6和MMP-2在正常膀胱粘膜和膀胱移行细胞癌中的表达情况和各个指标之间的相关性。 结果显示,在膀胱移行细胞癌组织中,PTEN的阳性率为69.05%,随着肿瘤的分期分级的升高,PTEN的染色强度具有下降趋势,具有显着性差别。膀胱癌中FAK蛋白的阳性表达率为66.7%,与正常粘膜相比较具有显着性差

罗俊航,陈炜,戴宇平,陈凌武,石华,廖冰^[6]（2004）在《CD44v6和survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义》文中提出[目的]探讨细胞黏附分子CD44v6和凋亡抑制蛋白survivin的表达与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期及预 后的关系。[方法]应用免疫组织化学方法检测56例膀胱移行细胞癌及5名正常人膀胱黏膜标本中CD44v6和survivin的表 达。[结果]56例膀胱癌的CD44v6和survivin的表达总阳性率为57.1％和85.7％,且随着癌细胞分化程度降低、癌组织浸润 深度增加CD44v6的表达减弱,而survivin在分级和分期的表达无统计学差异。CD44v6和survivin的表达与肿瘤复发无明显相 关。[结论]CD44v6的表达与膀胱移行细胞癌的分级、分期有关,有助于膀胱癌早期诊断;survivin的高表达率可能成为膀胱移 行细胞癌辅助诊断指标之一。

梁奕志^[7]（2012）在《胃癌组织中CD44v6和Livin的表达及临床意义》文中进行了进一步梳理目的探讨粘附分子变异体CD44v6和凋亡抑制蛋白Livin在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP方法检测了59例手术切除胃癌组织及59例相应癌旁正常胃粘膜组织、15例胃息肉、15例慢性胃炎中CD44v6和Livin的表达水平。结果CD44v6蛋白在胃癌组织中阳性率为64.41%，癌旁正常胃粘膜组织、胃息肉、慢性胃炎阳性率分别为5.08%、0%、13.33%；Livin蛋白在胃癌组织中阳性率为52.54%，癌旁正常胃粘膜组织、胃息肉、慢性胃炎阳性率分别为6.78%、0%、6.67%；CD44v6表达与胃癌的浸润深度、分化程度、淋巴结转移在统计学上差异均显着（P<0．05）．而与胃癌的病理学类型无关（P>0.05）；Livin蛋白阳性率与胃癌组织的分化程度、淋巴结转移均有显着性差异（P<0.05），而与浸润深度、病理学类型不相关（P>0.05）；CD44v6蛋白与Livin蛋白在胃癌组织中的阳性表达呈正相关（r=0.286,P=0.028）。结论CD44v6和Livin在胃癌组织中表达增强，与胃癌的发生和发展密切相关，可作为胃癌的生物学标志物，可能成为胃癌治疗的新靶点。

郭凯^[8]（2011）在《膀胱尿路上皮癌中Survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-△Ex3的表达及其意义》文中指出研究背景及目的癌症是一种多步骤、多阶段及多基因参与的疾病。同其他类型的肿瘤一样,膀胱癌的发生和发展是通过在基因水平和表观基因水平影响细胞的增殖和程序性死亡（凋亡）来调控的。凋亡及抗凋亡基因相互平衡决定每一个细胞的存活或凋亡。抗凋亡基因的异常表达会导致细胞生存期延长,从而启动肿瘤开始程序,加快进程或转移。伴随着人类基因组计划的完成,各种基因的筛选已成为目前基因研究的热点,而探索肿瘤进展和转移的相关基因对判定肿瘤的预后、指导治疗措施的选择及研发新的治疗措施和方案都具有重要的指导意义。其中最重要的凋亡调控蛋白家族有两个：Bcl-2蛋白家族和凋亡抑制蛋白家族（inhibitor of apoptosis family of protein, IAPs）。IAPs包括1-3个杆状病毒IAP重复结构域（BIR）,每个BIR结构域由大约60-70个氨基酸组成,重复结构域（BIR）被认为是在抗凋亡作用中起主要作用的区域。1997年由耶鲁大学Ambrosini等利用效应细胞蛋白酶受体-1（efector cell proteaserecep tor-1, EPR-1）的cDNA在人类基因库种筛选克隆一种凋亡抑制基因Survivin,它是凋亡抑制蛋白家族中发现的功能最强的凋亡抑制蛋白,它通过抑制凋亡、调节细胞周期参与了肿瘤的发生和发展。它在人类常见的大多数恶性肿瘤中表达,但在正常分化组织中极少表达。目前,国内外研究发现survivin基因在膀胱肿瘤的发生发展中具有重要作用,指出survivin敏感性及特异性较高,可以作为膀胱癌诊断和预后判断的的标志物。随着对其深入研究,发现其存在多种剪接变异体,其中survivin-2B和survivin-ΔEx3因其功能和作用的独特而受到重视。Survivin-2B在survivin的基础上增加了69bp的外显子2B,编码产生165个氨基酸外显子2B的插入干扰BIR结构域,使survivin-2B的抗凋亡活性明显下降。survivin-AEx3被选择剪切掉外显子3,并引起外显子4区域编码顺序的改变,终止密码子后移至3’端非翻译区,编码137个氨基酸,产生增强的抗凋亡活性。目前一些研究表明,survivin-2B和survivin-ΔEx3在肿瘤的发展中显示了不同的作用。在软组织肉瘤及胃癌中可检测到survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-ΔEx3存在。在脑部肿瘤中survivin,survivin-ΔEx3的表达高于良性对照组,survivin-ΔEx3在恶性脑肿瘤中高表达,而survivin-2B在良性组织中高表达。然而迄今为止关于膀胱尿路上皮癌中survivin剪接变异体的表达的研究较少。膀胱尿路上皮癌是我国泌尿系最常见的恶性肿瘤,浅表性膀胱癌的治疗方法主要为经尿道肿瘤电切术,术后辅助化疗药物膀胱灌注。治疗后复发率可高达61%,大部分还会出现分级、分期的进展或者发生转移,从而丧失根治手术的机会。目前认为导致膀胱肿瘤术后较高复发率因素有：（1）膀胱癌病理类型是影响其局部复发的主要因素,特别是盆腔复发的危险性与肿瘤的病理类型直接相关；（2）膀胱肿瘤局部复发与原发肿瘤的分期、分级也有相关性,并按顺序依次递增；（3）显露困难操作受限致切除范围不够深,而引起切缘癌组织残留导致癌术后复发；（4）术后不能进行正规的膀胱灌注及定期随访。故对预后的判断、随访观察尤其重要。目前膀胱癌的诊断和随访观察主要依赖于膀胱镜检查及病理学活检,通过膀胱镜检查可以发现膀胱是否出现肿瘤,可以明确肿瘤的数目、肿瘤大小、形态及发生部位。并且可以对肿瘤或可疑病变部位进行活组织病理学检查以明确诊断。但其为有创性检查,存在导致患者痛苦、漏诊早期病变、并发症多等缺点。因此寻找敏感性、特异性高的膀胱癌生物标志物,将会对疾病预后判断,复发与否有指导意义；同时也可作为肿瘤靶向治疗的新靶点。本研究着重对膀胱尿路上皮癌中survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-ΔEx3的表达进行研究,分析其表达与临床病理资料的相关性。研究方法（1）材料2007年12月至2009年6月我院泌尿外科手术切除的标本,膀胱尿路上皮癌标本55例（包括初发及复发）,经病理证实,术前未予化疗和放疗。男性45例,女性10例,年龄30-87岁,中位年龄62.9岁。据WHO 2004病理分级：低级别25例,高级别30例；TNM临床分期系统分组：Ta-T136例,T2-T419例。取肉眼正常癌旁组织10例,同期前列腺增生患者正常膀胱组织10例作对照组。取组织无菌生理盐水冲洗,取大小约0.2cm3放入EP管中立即置于-80℃冰箱保存,其余送病理检查。Survivin兔抗人单克隆抗体（齐康生物）、SP免疫组化试剂盒（博士德）,Trizol试剂、RT-PCR试剂盒、PCR所用引物及探针（达安公司）,ABI 3900台式高通量DNA合成仪,科大创新HC-3018R高速冷冻离心机,ABI9700 PCR仪,ABI 7500全自动荧光定量PCR仪。（2） RT-PCR法测定组织中Survivin,survivin-2B和survivin-ΔEx3表达取适量组织至新的1.5mlEP管中,用玻璃棒研磨,加入Trizol 1ml,充分振荡混匀,加入氯仿0.2ml,盖紧盖子,用力摇动15s,15-30℃孵育2-3min,4℃12000r/min离心15mmin,取上清液至新的1.5mL EP管,总RNA提取按照Trizol说明书进行,选择β-actin作为内参基因,GenBank上查找基因mRNA序列,Primer express 2.0软件设计引物如下：5’-TCC ACT GCC CCA CTG AGA AC-3’和5’-CCT TCC AGC TCC TTG AAG CA-3’扩增Survivin （67bp）; 5’-GCGGATCACGAGAGAGGAAC-3’和5’-AGTTTCAAAAATTCACCAAGGGTTA-3’扩增survivin-2B （102bp） 5’-AGTTTCAAAAATTCACCAAGGGTTA-3’和5’-GAATTTGAGGAAACTGCGGAGA-3’扩增survivin-ΔEx3（119bp）; 5’-GCA TGG GTC AGA AGG ATT CCT-3’和5’-TCG TCC CAG TTG GTG ACG AT-3’扩增内参β-actin（106bp）。合成引物应用ABI 3900台式高通量DNA合成仪。取4μlRNA模板做逆转录反应,标准曲线定量法参照说明书制备阳性标准品及其梯度,阴性质控标准品采用灭菌双蒸水。待测样本和阳性标准品进行荧光定量PCR反应,PCR反应条件为：93℃3分钟,93℃30秒,55℃45秒,72℃45秒,共40循环。反应结束后,由电脑自动分析并计算结果。通过测量Survivin、survivin-2B和survivin-AEx3基因和内参照基因β-actin的扩增片断密度的比值,计算出相对表达量。数据经统计软件SPSS 13.0对Survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-ΔEx3 mRNA在膀胱癌与正常组织之间及55例膀胱癌患者中分别就肿瘤病理分级、临床分期及复发等的相对表达量数据进行分析处理,均数比较采用T检验,选取检验水准a=0.05。（3）免疫组化染色采用免疫组织化学二步法,切片脱蜡、水化后进行抗原修复并清除过氧化物酶,切片加上1：100稀释的一抗survivin,37℃120min, PBS洗2mmin×3次,滴加二抗工作液A液,37℃孵育20min,PBS洗2min×3次,滴加二抗工作液B液,37℃孵育20 min, PBS洗2min×3次,DAB显色2-5min,显微镜下控制,自来水冲终止反应,苏木素复染约1min,自来水冲蓝化5min,梯度酒精脱水二甲苯透明后中性树胶封片,用PBS代替一抗做阴性对照。结果判断由两名病理科医生采用盲法阅片的方式进行,结合北航图像分析系统软件来帮助进行结果判断。结果判定标准：免疫组化产物阳性呈浅黄色-棕褐色细颗粒状,survivin蛋白阳性表达定位于细胞浆。每张切片选取5个高倍视野（×400倍）,每个视野随机计数100个细胞,求其平均阳性率阳性细胞比例的均值≥25%为表达阳性。否则为阴性。研究结果：Survivin、survivin-2B和survivin-ΔEx3 mRNA在膀胱尿路上皮癌中均有表达,表达量为0.560±0.286,0.050±0.025,0.467±0.229;对照组中survivin-2B皆有表达,表达量为0.017±0.010, Survivin、survivin-ΔEx3仅5例及6例微量表达,表达量为0.003±0.006,0.003±0.003。癌组织中的表达水平比正常组织明显上调,差异有显着性（P<0.01）。考虑survivin及其剪接变异体在肿瘤的发生发展中起到一定的作用。不同病理分级和临床分期的膀胱尿路上皮癌,Survivin、survivin-2B和survivin-ΔEx3 mRNA的表达差异有统计学意义（P<0.01）。随着病理分级、临床分期的升高, Survivin和survivin-ΔEx3 mRNA的表达升高；而survivin-2B mRNA表达则降低。推测survivin-ΔEx3可能具有和survivin类似的作用。从另一方面证实了survivin和survivin-ΔEx3具有抗凋亡作用,而survivin-2B的抗凋亡作用减弱了。同时推测survivin-2B可能具有拮抗survivin和survivin-ΔEx3抗凋亡功能的作用。55例膀胱尿路上皮癌组织中阳性表达例数46例,阴性表达例数9例,Survivin表达的阳性率为83.6%；20例正常膀胱粘膜组织中阳性表达例数2例,阴性表达例数18例,Survivin表达的阳性率为10%。进行卡方检验,χ2值为34.517,P值为0.000因此,膀胱尿路上皮癌组织中Survivin表达的阳性率高于正常膀胱粘膜组织。（P<0.01）研究结论：1.膀胱尿路上皮癌组织中Survivin、survivin-2B和survivin-ΔEx3的表达水平比正常组织明显上调,表明Survivin及其剪接变异体在膀胱尿路上皮癌组织中存在过表达,对于膀胱尿路上皮癌的发生与发展有重要作用。2. Survivin、survivin-2B和survivin-ΔEx3在膀胱尿路上皮癌的发生和发展中起不同作用,并且和病理分级、临床分期都具有一定的相关性。

张旗^[9]（2011）在《PLK1和Cyclin B1在膀胱移行细胞癌中的表达及意义》文中提出目的膀胱移行细胞癌为泌尿系最常见的恶性肿瘤,在恶性肿瘤发病率中世界排名第五,在泌尿系疾病死亡率中排名第二。近年来有发病率提高的趋势,其具有多中心,易复发,及浸润性生长的特点,目前多采用手术为主的综合治疗,治疗效果仍不理想。迫切需要其他有效的治疗手段。近年来分子生物学的迅速发展,为寻找新的、有效的治疗膀胱移行细胞癌的方法提供了理论基础。研究表明,膀胱移行细胞癌的发生发展是多基因多因素综合的结果,其中细胞周期调节起重要的作用。保罗样激酶1（polo like kinase 1,PLK1）是一类广泛存在于真核细胞中呈周期依赖性表达的丝/苏氨酸激酶,在有丝分裂期发挥重要作用,与细胞增殖密切相关,且与多种肿瘤的某些生物学行为及不良预后相关。本实验探讨膀胱移行细胞癌组织中PLK1、Cyclin B1的表达及其临床意义,可能为膀胱移行细胞癌的早期诊断及治疗提供理论依据。方法采集41例膀胱移行细胞癌的手术切除标本组织和10例正常膀胱组织（距肿瘤2cm以上的癌旁正常粘膜）,所有标本均置于福尔马林溶液中固定,所有组织均经病理证实,采用免疫组织化学S-P法检测二者中PLK1、Cyclin B1的阳性表达情况,分析两者与临床、病理参数的联系及两者之间的相关性。结果膀胱移行细胞癌中PLK1主要表达于胞核,为棕黄色或棕褐色,部分浆、核同时表达,Cyclin B1主要表达于胞浆,为棕黄色或棕褐色。膀胱移行细胞癌组织中PLK1、Cyclin B1的阳性表达率分别为51.2.0%（21/41）、56.1%（23/41）,正常膀胱组织中PLK1及Cyclin B1蛋白弱阳性表达或不表达,差异有统计学意义（P<0.01）。PLK1表达与年龄、性别、临床分期及淋巴结状态无关（P>0.05）,与病理分级有关,且在临床分期增高时,病理分级间表达差异有统计学意义（P<0.05）,阳性表达率分别为75.0%、22.2%。Cyclin B1表达与年龄、性别、淋巴结状态无关（P>0.05）,与临床分期及病理分级密切相关,随着临床分期的升高而升高,阳性表达率分别为40.0%、71.4%,差异有统计学意义（P<0.05）,在不同临床分期时,都随着病理分级的升高而升高,差异有统计学意义（P<0.05）。PLK1与Cyclin B1在膀胱移行细胞癌中的表达之间存在一定的相关性（r =0.317）。结论PLK1与Cyclin B1在膀胱移行细胞癌组织中高表达,且与病理分级、临床分期密切相关,提示PLK1、Cyclin B1在膀胱移行细胞癌的发生和进展发挥重要作用,且两者存在一定的调节关系,PLK1与Cyclin B1有望为膀胱移行细胞癌分子水平上的研究治疗提供新的理论依据及治疗的新靶点。

谢宇^[10]（2010）在《Ezrin在膀胱移行细胞癌的表达、作用及机制研究》文中研究指明膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤。Ezrin被研究发现同许多恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移有关。但是ezrin同膀胱移行细胞的作用不清楚,并且未见有用RNAi技术研究ezrin同膀胱移行细胞癌关系的研究。本实验我们首次使用siRNA抑制膀胱移行细胞癌细胞株T24中ezrin基因的表达,研究ezrin在膀胱癌发生、发展、侵袭中的作用.本实验同时探讨了RhoA与ezrin在膀胱癌中的关系。为探讨膀胱癌基因治疗新途径提供理论基础。第一部分膀胱移行细胞癌组织中ezrin、CD44的表达目的探讨ezrin、CD44在膀胱移行细胞癌中的表达与意义方法1、采用免疫组织化学检测60例膀胱移行细胞癌与14例正常膀胱组织中ezrin、CD44的蛋白表达。2、采用RT-PCR方法检测40例膀胱移行细胞癌与10例正常膀胱组织中ezrin、CD44的mRNA表达.结果1、ezrin、CD44在膀胱移行细胞癌组织中的蛋白表达明显高于正常膀胱组织（P<0.05）, ezrin、CD44的蛋白表达与膀胱移行细胞癌组织的病理分级、临床分期密切相关,ezrin、CD44蛋白表达的阳性表达随着膀胱肿瘤病理分级、临床分期的增高而增高（P<0.05）。2、ezrin、CD44在膀胱移行细胞癌组织中的mRNA表达明显高于正常膀胱组织（P<0.05）, ezrin、CD44的mRNA表达与膀胱移行细胞癌组织的病理分级、临床分期密切相关,ezrin、CD44mRNA的阳性表达随着膀胱肿瘤病理分级、临床分期的增高而增高（P<0.05）。3、ezrin、CD44的蛋白表达在膀胱移行细胞癌中有正相关性。结论ezrin、CD44蛋白均在BTCC中表达异常增强,在BTCC发生、发展过程中起重要作用。ezrin可作为诊断、判断预后、指导治疗、随访检测的指标。ezrin基因可能成为BTCC新的治疗靶点。第二部分应用RNAi沉默ezrin基因对膀胱移行细胞癌株生物学行为的影响目的探讨ezrin基因表达与膀胱移行细胞癌株生物学行为的关系。方法1、设计siRNA ezrin,用于干扰并下调T24细胞中目的基因的表达。2、采用RT-PCR以及western-blot方法检测实施siRNA干扰后,T24细胞中ezrin的mRNA以及蛋白量。3、采用绘制细胞生长曲线、MTT实验、流式细胞检测、细胞划痕实验以及细胞迁徙实验、细胞粘附实验,观察siRNA干扰后,细胞生物学行为变化。结果1、设计的siRNA能够很好的对目的基因产生沉默效应。2、转染siRNA后的实验组T24细胞,ezrin的mRNA表达量较对照组明显下调,差异有统计学意义（P<0.05）。ezrin蛋白表达量显着下调,差异有统计学意义。3、转染siRNA后的实验组T24细胞,细胞生长速度较对照组明显减慢,差异有统计学意义（P<0.05）；实验组T24细胞凋亡率为（30.37±8.37）%,实验组细胞凋亡率同空白组、阴性对照组比较,凋亡率明显增加,（p<0.05）。24小时后,实验组T24细胞迁移到划痕区的细胞明显低于空白组和阴性对照组。实验组发生迁移细胞数目明显降低,迁移能力明显下降,与对照组比较差异有显着性（P<0.05）。siRNA干扰可以降低细胞的粘附能力,空白组、阴性对照组、实验组细胞粘附率分别为72.3±5.1%,70.5±5.7%以及39.2±4.6%,差异有统计学意义（p<0.05）结论siRNA可以明显下调T24细胞中ezrin的mRNA以及蛋白表达量,且导致细胞生物学行为的改变,表现为细胞的生长减慢、凋亡增加,细胞的迁移能力及粘附能力降低。第三部分ezrin同RhoA信号传导通路关系的研究目的探讨RhoA及ezrin在膀胱癌中的关系。方法1)EGF作用于膀胱移行细胞癌T24细胞,采用Western-blot检测ezrin、RhoA、磷酸化RhoA的蛋白含量变化。2)将EGF及RhoA激酶抑制剂Y-27632作用于膀胱移行细胞癌T24细胞,检测ezrin、磷酸化RhoA的蛋白含量变化。结果Western-blot结果显示,在给予EGF刺激后,p-RhoA水平逐渐升高,于10、30、60、90min时分别升高了70±11%,250±23%,420±47%以及490±43%。在EGF刺激下RhoA蛋白表达无明显变化。Western-blot结果显示,在给予EGF刺激后,ezrin水平逐渐升高,于8、16、24小时分别升高了170±60%,310±73%,750±47%。用Y-27632预处理T24细胞,EGF诱导的RhoA磷酸化水平明显受到抑制,同时ezrin蛋白表达水平也受到抑制。结论RhoA可能作为ezrin的上游调控元件。

二、CD44v6和survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、CD44v6和survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义（论文提纲范文）

（1）结肠黏液腺癌黏膜组织CD44v6和Survivin的表达及临床意义（论文提纲范文）

（2）β-catenin、APC在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义（论文提纲范文）

（3）p53、p21、VEGF和CXCR4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义（论文提纲范文）

（4）CD44v6在人膀胱癌组织的表达及其对膀胱癌细胞生物学行为的影响（论文提纲范文）

（5）PTEN、FAK、MMP-2和CD44v6在膀胱移行细胞癌中的表达及意义（论文提纲范文）

（7）胃癌组织中CD44v6和Livin的表达及临床意义（论文提纲范文）

（8）膀胱尿路上皮癌中Survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-△Ex3的表达及其意义（论文提纲范文）

（9）PLK1和Cyclin B1在膀胱移行细胞癌中的表达及意义（论文提纲范文）

（10）Ezrin在膀胱移行细胞癌的表达、作用及机制研究（论文提纲范文）

四、CD44v6和survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义（论文参考文献）

• [1]结肠黏液腺癌黏膜组织CD44v6和Survivin的表达及临床意义[J]. 贾丽伟,郑超,王大巍,杨晶晶,刘敬禹,吴月明,王大巍. 中国老年学杂志, 2017(17)
• [2]β-catenin、APC在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义[D]. 刘中阳. 郑州大学, 2013(S2)
• [3]p53、p21、VEGF和CXCR4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义[D]. 陈小慧. 苏州大学, 2013(S2)
• [4]CD44v6在人膀胱癌组织的表达及其对膀胱癌细胞生物学行为的影响[D]. 李倩. 天津医科大学, 2012(02)
• [5]PTEN、FAK、MMP-2和CD44v6在膀胱移行细胞癌中的表达及意义[D]. 刘光明. 天津医科大学, 2005(07)
• [6]CD44v6和survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义[J]. 罗俊航,陈炜,戴宇平,陈凌武,石华,廖冰. 中山大学学报(医学科学版), 2004(S2)
• [7]胃癌组织中CD44v6和Livin的表达及临床意义[D]. 梁奕志. 福建医科大学, 2012(08)
• [8]膀胱尿路上皮癌中Survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-△Ex3的表达及其意义[D]. 郭凯. 南方医科大学, 2011(05)
• [9]PLK1和Cyclin B1在膀胱移行细胞癌中的表达及意义[D]. 张旗. 安徽医科大学, 2011(11)
• [10]Ezrin在膀胱移行细胞癌的表达、作用及机制研究[D]. 谢宇. 中南大学, 2010(11)

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